FGF2及FGF7在雄激素性脫發(fā)發(fā)病中作用的初步研究.pdf

1、目的：
　　毛囊生長是一個復雜的周期性過程，包括毛發(fā)生長期、退行期、休止期。雖然調(diào)控毛發(fā)周期的機制還未完全闡明，目前已明確:毛乳頭與鄰近毛囊上皮、毛母質(zhì)、外毛根鞘之間的相互作用調(diào)控著每個周期的延續(xù)和過渡。間質(zhì)來源的毛乳頭位于毛囊的底部，外周由毛母質(zhì)包繞，它在體內(nèi)和體外具有誘導毛囊生長的特性。來源于毛乳頭細胞的信號可以直接影響鄰近毛母質(zhì)細胞和外毛根鞘細胞的生長，并且可以調(diào)控毛囊生長周期。這些信號包括sonic hedgehog(Sh

2、h)途徑、胰島素樣生長因子(IGF-1)、wnt/β-catenin途徑、骨形成蛋白(BMP)、成纖維細胞因子(FGF)、轉(zhuǎn)化生長因子-β(TGF-β)和肝細胞生長因子(HGF)等。
　　雄激素性脫發(fā)(AGA)是最常見的男性脫發(fā)疾病，發(fā)病機制涉及局部雄激素分泌增多、雄激素受體(AR)表達量增多、Ⅱ型5α還原酶和旁分泌等，而雙氫睪酮(DHT)目前被認為是雄激素性脫發(fā)主要致病因素。睪酮在Ⅱ型5α還原酶的作用下可形成活性更強的DHT，Ⅱ

3、型5α還原酶的致病作用已經(jīng)非常明確，男性雄激素性脫發(fā)的首選治療方案是長期口服Ⅱ型5α還原酶抑制劑，它可降低患者血清和頭皮的DHT濃度，目前DHT誘導的雄激素性脫發(fā)的發(fā)病機制尚未完全明確。
　　既往研究發(fā)現(xiàn)DHT促進AGA患者頂部毛乳頭細胞分泌TGF-β，從而抑制毛囊上皮細胞的生長，DHT同時也可以促進胡須部毛乳頭細胞分泌IGF-1，從而促進毛囊上皮細胞的生長。本實驗將進一步研究DHT誘導的旁分泌途徑，初步探索FGF2及FGF7是否

4、參與男性雄激素性脫發(fā)的發(fā)病。
　　方法和結(jié)果：
　　1、從人頭皮中分離出毛乳頭，體外培養(yǎng)毛乳頭細胞，檢測各代毛乳頭細胞中AR的表達。
　　結(jié)果:體外傳代培養(yǎng)時，第6代毛乳頭細胞AR蛋白表達量明顯低于第3代毛乳頭細胞。
　　2、構(gòu)建AR腺病毒載體并轉(zhuǎn)染毛乳頭細胞，RT-PCR、Western blot、免疫熒光檢測AR的表達，CCK-8法檢測AR腺病毒對人毛乳頭細胞增殖的影響。
　　結(jié)果:對照組（未轉(zhuǎn)染腺病毒

5、的毛乳頭細胞）、空載體組、AR過表達組各組之間毛乳頭細胞的增殖無統(tǒng)計學差異。
　　3、以下步驟均在過表達AR的毛乳頭細胞中進行，根據(jù)實驗是否加入DHT、0.01％乙醇進行分組，脫發(fā)區(qū)頂部毛乳頭細胞組包括:0M(0mol/L)-DHT組、0.01％乙醇組、10nM(10nmol/L)-DHT組;枕部毛乳頭細胞組包括:0M-DHT組、0.01％乙醇組、10nM-DHT組。RT-PCR、Western blot、ELISA檢測FGF7及

6、FGF2的表達。
　　結(jié)果:頂部毛乳頭細胞中，0.01％乙醇組FGF7mRNA表達水平高于10nM-DHT組[(1.58±0.15) vs(0.83±0.18) P=0.018]，0M-DHT組FGF2mRNA表達量高于10nM-DHT組[(0.90±0.19) vs(0.41±0.11)P=0.22]。枕部毛乳頭細胞中，F(xiàn)GF7及FGF2mRNA表達量差異無統(tǒng)計學意義。細胞內(nèi)FGF7及FGF2的蛋白檢測:脫發(fā)區(qū)毛乳頭細胞中，0M

7、-DHT組FGF7蛋白表達水平高于10nM-DHT組[(0.393±0.060) vs(0.282±0.019) P=0.038]，10nM-DHT組FGF2蛋白表達水平高于0.01％乙醇組[(0.294±0.019) vs(0.201±0.058) P=0.021]。枕部毛乳頭細胞中，10nM-DHT組FGF7蛋白表達水平高于0M-DHT組[(0.207土0.025) vs(0.108±0.038)P=0.038]，F(xiàn)GF2蛋白表達差

8、異無統(tǒng)計學意義。分泌型FGF7及FGF2蛋白檢測:頂部毛乳頭細胞中，與0nM-DHT組相比，當使用含10nM-DHT的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)頂部毛乳頭細胞時，F(xiàn)GF7外分泌量從216.446pg/mL上升至249.942pg/mL，F(xiàn)GF2外分泌量從123.125pg/mL下降至51.667 pg/mL，而與0.01％乙醇組相比，當加入10nM-DHT時，F(xiàn)GF2外分泌量從12.381pg/mL上升至51.667 pg/mL。
　　結(jié)論：