版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
前期工作發(fā)現(xiàn),內(nèi)皮型一氧化氮合酶第4內(nèi)含子的27堿基重復(fù)子產(chǎn)生相應(yīng)27nt miRNA,并對(duì)eNOS的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)有負(fù)反饋調(diào)節(jié)作用。進(jìn)一步探討該內(nèi)含子源性27nt miRNA對(duì)內(nèi)皮型一氧化氮合酶基因調(diào)節(jié)的分子機(jī)制及臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子AP-1的作用機(jī)制。
1.明確27nt miRNA對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞表型的調(diào)控作用
2.闡明27nt miRNA抑制內(nèi)皮細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移的機(jī)制。
3.旨在從新的
2、角度闡明內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的分子機(jī)制,為尋找新的心血管疾病治療靶點(diǎn)提供理論依據(jù)。
方法:
1.體外觀察27nt miRNA對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞生物學(xué)性狀的影響:將人工合成的wt-27nt miRNA和mut-27nt miRNA mimics分別轉(zhuǎn)染內(nèi)皮細(xì)胞,觀察內(nèi)皮細(xì)胞的增殖(MTT法和細(xì)胞克隆法)、遷移(細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn))、侵襲(Transwell實(shí)驗(yàn))等生物學(xué)行為的變化。
2.27nt miRNA下游靶基因的
3、預(yù)測(cè)、驗(yàn)證和功能研究:我們使用TargetScan靶基因預(yù)測(cè)軟件并分析相關(guān)因素,篩選27nt miRNA可能的下游靶基因AP-1。然后。應(yīng)用熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)驗(yàn)證27nt miRNA對(duì)AP-1的負(fù)性調(diào)控作用。進(jìn)一步采用qRT-PCR、免疫組化和免疫印跡實(shí)驗(yàn)(western blotting)檢測(cè)靶基因AP-1 mRNA和蛋白和eNOSmRNA和蛋白表達(dá)水平的改變。
3.在VEGF生長因子刺激下,進(jìn)一步采用qRT-PCR和免疫印跡
4、實(shí)驗(yàn)(western blotting)檢測(cè)共轉(zhuǎn)染27nt miRNA和AP-1后eNOS mRNA和蛋白表達(dá)水平的改變,最后應(yīng)用MTT法觀察內(nèi)皮細(xì)胞的增殖情況。
結(jié)果:
1.過表達(dá)27nt miRNA對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和遷移以及侵襲具有顯著的抑制作用,
2.通過生物信息學(xué)的預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn),AP-1可能是27nt miRNA的下游一個(gè)靶基因,熒光素酶報(bào)告表明,27nt miRNA對(duì)于它結(jié)合位點(diǎn)熒光報(bào)告基因活性具有顯
5、著抑制作用,但其對(duì)突變體和對(duì)照質(zhì)粒的活性卻沒有顯著性的影響。前期工作發(fā)現(xiàn),eNOS不是27nt miRNA的預(yù)測(cè)靶基因,過表達(dá)27nt miRNA對(duì)eNOS mRNA以及蛋白表達(dá)水平有明顯影響。以上研究證實(shí)27nt miRNA通過轉(zhuǎn)錄后水平負(fù)性調(diào)控AP-1參與內(nèi)皮細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。
3.在VEGF的刺激下,共轉(zhuǎn)染27nt miRNA和AP-1對(duì)eNOS mRNA和蛋白水平影響更為顯著。
結(jié)論:
1.過表達(dá)2
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 27nt--miRNA對(duì)eNOS表達(dá)-活性調(diào)節(jié)及NO生成、血管新生的影響及相關(guān)機(jī)制研究.pdf
- AP-1在硒拮抗砷致癌作用中的調(diào)控機(jī)制研究.pdf
- 肺癌中激活蛋白AP-1及其相關(guān)調(diào)控因子表達(dá)的研究.pdf
- IKCa1相關(guān)的miRNA對(duì)HeLa細(xì)胞增殖、遷移及侵襲作用機(jī)制初探.pdf
- AP-1 decoy ODNs對(duì)心肌成纖維細(xì)胞增殖、膠原合成及MMPs的影響.pdf
- Leptin對(duì)HUVECs的氧化應(yīng)激和增殖作用及其機(jī)制的研究.pdf
- 感染性早產(chǎn)中AP-1對(duì)趨化因子的調(diào)控及姜黃素抑制作用的探討.pdf
- 自噬對(duì)HUVECs增殖和血管形成中的影響及其作用機(jī)制.pdf
- 馬TRIM5α激活A(yù)P-1信號(hào)通路的分子機(jī)制研究.pdf
- 白藜蘆醇對(duì)大鼠肺纖維化AP-1干預(yù)作用的研究.pdf
- TAG1信號(hào)對(duì)膠質(zhì)瘤干細(xì)胞增殖與分化的作用及相關(guān)基因調(diào)節(jié)機(jī)制的研究.pdf
- Jembrana病毒LTR及細(xì)胞因子AP-4調(diào)節(jié)機(jī)制的研究.pdf
- 胰島素對(duì)大鼠vsmc增殖及下調(diào)AP-1抑制血管平滑肌α肌動(dòng)蛋白表達(dá)的研究.pdf
- miRNA調(diào)節(jié)PD-1+耗竭性T細(xì)胞的作用機(jī)制研究.pdf
- 新型造血相關(guān)轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子EDAG作用機(jī)制的初步研究.pdf
- NF-κB和AP-1參與低氧誘導(dǎo)大鼠CRHR1基因轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié).pdf
- Anti--miR-21對(duì)eNOS表達(dá)調(diào)節(jié)和血管生成的影響及相關(guān)機(jī)制研究.pdf
- SIRS-肺損傷大鼠模型與抗炎因子表達(dá)及AP-1活性變化的研究.pdf
- 葉黃素介導(dǎo)AP-1失激活的抗人乳腺癌MCF-7細(xì)胞增殖效應(yīng)及其機(jī)制研究.pdf
- AP-1信號(hào)傳導(dǎo)通路細(xì)胞模型的建立.pdf
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論