miRNA調節(jié)PD-1+耗竭性T細胞的作用機制研究.pdf

1、分類號：密級：UDC：學號：356529213007南昌大學博士研究生學位論文miRNA調節(jié)調節(jié)PD1耗竭性耗竭性T細胞的作用機制研究細胞的作用機制研究miRNAregulateofprogrammedcelldeath1exhaustedTcells培養(yǎng)單位（院、系）：南昌大學醫(yī)學院指導教師姓名、職稱：閔衛(wèi)平教授申請學位的學科門類：醫(yī)學博士學科專業(yè)名稱：臨床醫(yī)學論文答辯日期：2016年6月答辯委員會主席：程曉曙評閱人：2016年5月摘

2、要摘要第1章引言引言腫瘤微環(huán)境中存在多種因素可導致免疫不應答或免疫低下，造成腫瘤免疫耐受。造成腫瘤免疫耐受原因有免疫負調控分子的改變，以調節(jié)性T細胞（RegulatyTcells，Tregs）為代表的免疫抑制細胞的變化，可溶性細胞因子分泌改變，代謝功能異常等。耗竭性T細胞是一種T細胞功能缺陷的狀態(tài)，是一群效應功能減弱，持續(xù)表達抑制性受體的T細胞，這些細胞在免疫耐受中起著重要作用。其表達的程序性細胞死亡因子1（programmedcell

3、death1，PD1）、T細胞免疫球蛋白域和粘蛋白域蛋白3（Tcellimmunoglobulindomainmucindomainprotein3TIM3）、B和T淋巴細胞衰減子（BTlymphocteattenuat，BTLA）是最重要的免疫負調控分子。PD1程序性死亡因子配體1（programmedcelldeathlig1，PDL1）信號通路可以負性調節(jié)效應T細胞活性，與腫瘤免疫耐受及腫瘤進展有關。micrNA（miRNA）參與

4、腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程，在染色體異常、基因突變、基因多態(tài)性和表觀遺傳學改變等過程中發(fā)揮重要作用。本課題系統(tǒng)探討miRNA和腫瘤微環(huán)境中耗竭性T細胞的關系，為腫瘤診斷及腫瘤免疫治療尋找新的靶點和方向。第2章CD4T細胞中細胞中PD1和PD1細胞細胞miRNAs表達譜差異表達譜差異目的：目的：比較CD4T細胞中PD1和PD1細胞miRNAs表達譜差異，篩選PD1相關miRNA。方法：方法：建立小鼠黑色素瘤模型，分離荷瘤小鼠淋巴細胞，流式細胞儀分

5、選CD4PD1和CD4PD1T淋巴細胞，AffymetrixmiRNA3.0表達譜芯片檢測各組細胞miRNA表達，并用RTqPCR驗證。miRa軟件預測靶基因結合位點。雙熒光素酶報告基因測試系統(tǒng)檢測miRNA能否結合PD13’UTR。結果：結果：CD4PD1和CD4PD1T淋巴細胞中，共19個miRNA差異表達，其中8個miRNA在CD4PD1細胞中表達上調，11個miRNA在CD4PD1細胞中表達下調。RTqPCR檢測11個miRNA