整合素β1上異常的β1,6-GlcNAc和bisecting GlcNAc糖支鏈參與調(diào)控早期自然流產(chǎn).pdf

1、目的：
　　N-乙酰氨基葡萄糖轉(zhuǎn)移酶V（GnT-V）催化形成β1,6-GlcNAc糖支鏈結(jié)構(gòu)。一般情況下，GnT-V被認(rèn)為是細(xì)胞遷移和侵襲的促進(jìn)因子。N-乙酰氨基葡萄糖轉(zhuǎn)移酶III（GnT-III）催化形成平分型糖支鏈結(jié)構(gòu)（bisecting GlcNAc, bis-GlcNAc），GnT-III則通常被認(rèn)為是腫瘤細(xì)胞遷移和侵襲的抑制因子，且GnT-III的過表達(dá)能夠抑制GnT-V的功能。有研究證實(shí)GnT-V及其產(chǎn)物β1,6-Gl

2、cNAc糖支鏈的表達(dá)以及GnT-V的酶活性在正常妊娠前三個(gè)月胎盤中顯著高于后三個(gè)月妊娠胎盤。并且，GnT-V能夠通過整合素α5β1進(jìn)行糖基化修飾來調(diào)控絨毛膜癌細(xì)胞的侵襲，表明GnT-V在早期妊娠胎盤形成中發(fā)揮了重要作用。但是GnT-V和GnT-III在早期妊娠和自然流產(chǎn)中是否存在作用差異，目前還未見報(bào)道。本研究從臨床標(biāo)本入手，通過檢測(cè)早期正常妊娠和自然流產(chǎn)絨毛組織中GnT-V和GnT-III的mRNA（MGAT5和MGAT3）和蛋白表達(dá)

3、水平、分析兩種糖基轉(zhuǎn)移酶產(chǎn)物β1,6-GlcNAc和bisecting GlcNAc糖支鏈的表達(dá)定位、測(cè)定GnT-V和GnT-III酶活性以及確定GnT-V和GnT-III作用的靶蛋白，初步探討N-乙酰氨基葡萄糖轉(zhuǎn)移酶在早期妊娠中的作用機(jī)制，為早期自然流產(chǎn)的臨床診治提供新的研究思路。
　　方法：
　　1.標(biāo)本收集：①正常妊娠組：收集人正常孕第6-9周妊娠絨毛標(biāo)本60例（孕6、7、8、9周妊娠各15例）；②早期自然流產(chǎn)組（ea

4、rly spontaneous miscarriage, ESM）：收集孕第6-9周自然流產(chǎn)絨毛標(biāo)本，共40例（孕6、7、8、9周妊娠各10例）。
　　2.運(yùn)用real time PCR、Western blot分別檢測(cè)GnT-V和GnT-III在正常妊娠組和ESM組絨毛組織中的mRNA（MGAT5和MGAT3）和蛋白質(zhì)表達(dá)；
　　3.采用免疫熒光和 lectin fluorescence分別檢測(cè) GnT-V和GnT-III

5、、其產(chǎn)物β1,6-GlcNAc糖支鏈和bisecting GlcNAc糖支鏈在正常妊娠組和ESM組絨毛中的定位；
　　4.通過ELISA方法，檢測(cè)GnT-V和GnT-III在正常妊娠組和ESM組絨毛中的酶活性；
　　5.采用免疫共沉淀技術(shù)確定GnT-V和GnT-III作用的靶蛋白。
　　結(jié)果：
　　1.在正常妊娠絨毛組織中，GnT-V的mRNA（MGAT5）和蛋白表達(dá)水平及其產(chǎn)物β1,6-GlcNAc糖支鏈的表達(dá)

6、均在孕第9周最高（P<0.05），GnT-V的酶活性與其表達(dá)一致。GnT-V主要定位于絨毛合體滋養(yǎng)層細(xì)胞（STB）和細(xì)胞滋養(yǎng)層細(xì)胞（CTB）的細(xì)胞質(zhì)，β1,6-GlcNAc糖支鏈主要定位于STB和CTB的細(xì)胞表面。
　　2.在ESM組中，各孕周GnT-V的mRNA（MGAT5）和蛋白表達(dá)水平及其產(chǎn)物β1,6-GlcNAc糖支鏈的表達(dá)均顯著低于正常妊娠組（P<0.05）。
　　3.在孕6-9周正常妊娠絨毛組織中，GnT-III

7、（MGAT3）的mRNA和蛋白表達(dá)水平及其產(chǎn)物bis-GlcNAc糖支鏈的表達(dá)在孕第6周最高（P<0.05），GnT-III的酶活性與其表達(dá)一致。GnT-III主要定位于STB的細(xì)胞質(zhì)，而在CTB中的表達(dá)較弱，bis-GlcNAc糖支鏈主要定位于STB的細(xì)胞表面，而在CTB中的表達(dá)較弱。
　　4.在ESM組中，各孕周GnT-III的mRNA（MGAT3）和蛋白表達(dá)水平及其產(chǎn)物bis-GlcNAc糖支鏈的表達(dá)均顯著高于正常妊娠組（P

8、<0.05）。
　　5.正常妊娠組中GnT-V的酶活性顯著高于ESM組（P<0.05），而GnT-III的酶活性則明顯低于ESM組（P<0.05）。
　　6.在 ESM組中，各孕周的整合素α5亞基表面的β1,6-GlcNAc糖支鏈和bis-GlcNAc糖支鏈的表達(dá)與正常妊娠組比較均沒有顯著變化（P>0.05）；但整合素β1亞基表面的β1,6-GlcNAc糖支鏈的表達(dá)均低于正常妊娠組（P<0.05），并且其表面的bis-Glc

9、NAc糖支鏈均高于正常妊娠組（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1. GnT-V和GnT-III及其產(chǎn)物的表達(dá)，以及它們的酶活性在早期正常妊娠（孕6-9周）中存在著一定的動(dòng)態(tài)平衡規(guī)律，提示GnT-V和GnT-III在參與調(diào)控早期妊娠過程中發(fā)揮著一定的重要作用，早期自然流產(chǎn)的發(fā)生可能與GnT-V和GnT-III的異常表達(dá)相關(guān)。
　　2. ESM組中整合素β1上異常的β1,6-GlcNAc和bisecting GlcNAc