CCR6的表達(dá)和胃癌惡性程度及其預(yù)后的相關(guān)性研究.pdf

1、在探索人類惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展的認(rèn)識(shí)過程中，大量的數(shù)據(jù)已經(jīng)證明趨化因子-趨化因子受體系統(tǒng)和癌細(xì)胞的潛在轉(zhuǎn)移能力密切相關(guān)。趨化因子受體CCR6對(duì)結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移有著特別的親和力[4]。它的趨化因子配體在淋巴組織及肝組織中有顯著的表達(dá)[4]。趨化因子受體CCR6在胃癌細(xì)胞中的異常表達(dá)被報(bào)道，與器官選擇性轉(zhuǎn)移有著密切的關(guān)系[5、6]。然而，CCR6在胃癌中的所扮演的角色仍舊不明確。在目前的研究中，我們已發(fā)現(xiàn)CCR6在胃癌組織中表達(dá)上調(diào)預(yù)示胃癌患者的生

2、存期縮短。本論文的研究?jī)r(jià)值在于確定CCR6在胃癌中的表達(dá)情況以及闡明其臨床意義。
　　第一部分 CCR6蛋白在胃癌組織和癌旁正常組織中的表達(dá)以及與臨床病理特征的關(guān)系
　　目的:
　　用western blotting法檢測(cè)CCR6蛋白在胃癌組織和癌旁正常組織中的表達(dá)水平。用免疫組化法分析372例胃癌中CCR6蛋白的表達(dá)情況和表達(dá)水平。對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，闡明CCR6蛋白表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系。
　　方法:

3、
　　1、患者與組織樣本
　　收集2008年1月-2010年1月山東省齊魯醫(yī)院普外科372例胃癌手術(shù)患者的腫瘤組織標(biāo)本，對(duì)其回顧性研究。372例胃癌患者臨床病理特征:依據(jù)腫瘤的位置，對(duì)患者行全胃或部分胃切除術(shù)，部分病人行淋巴結(jié)清掃。任何遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的病人都不在本研究之列。224例女性，148例男性;≥65歲238例，≤65歲134例，平均年齡為58.1±11.7歲;按PTNM分期，T1+T2102例，T3+T4270例;其中21

4、8例(58.6％)患者發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、154例無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移;按ICUU胃癌TNM分期Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期的病例分別為82例(22.0％)、94例(25.3％)和196例(52.7％);按病理分化程度:高分化及中分化者108例(29.0％)，低分化及未分化者264例(71.0％)。胃癌侵及漿膜或外擴(kuò)展生長(zhǎng)者174例，未侵及漿膜者198例。脈管有癌栓者34例，無癌栓者338例。術(shù)后復(fù)發(fā)者156例、未復(fù)發(fā)者216例。
　　2、用western

5、blotting法檢查CCR6蛋白在胃癌組織和癌旁正常組織中的表達(dá)。
　　我們用免疫印跡法檢測(cè)30對(duì)胃癌/癌旁正常組織中CCR6的表達(dá)，結(jié)果顯示，相比于正常胃粘膜組織，胃癌組織中的CCR6表達(dá)明顯上調(diào)(P=0.0015)。
　　3、用免疫組化法分析胃癌CCR6蛋白的表達(dá)。
　　用免疫組化法分析372例胃癌CCR6蛋白的表達(dá)。結(jié)果顯示:在372例胃癌樣本中有210例(56.5％)呈高表達(dá)。CCR6的陽(yáng)性表達(dá)顆粒主要位于細(xì)

6、胞膜和細(xì)胞漿中(Fig.2c,d)，細(xì)胞核基本無表達(dá)。正常胃粘膜細(xì)胞有微弱的CCR6表達(dá)(Fig.2b)，腫瘤細(xì)胞內(nèi)的CCR6的表達(dá)在腸型胃癌(Fig.2c)和彌漫型胃癌(Fig.2d)增加明顯。CCR6在癌組織中的表達(dá)水平明顯高于正常胃粘膜(P＜0.001)。
　　4、分析CCR6蛋白表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系。
　　應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，用Chi-square檢驗(yàn)與Fisher精確檢驗(yàn)來分析CCR6表

7、達(dá)與臨床病理變量的關(guān)系。
　　結(jié)果顯示在胃癌漿膜外生長(zhǎng)組CCR6的高表達(dá)的比例明顯高于無胃癌漿膜外生長(zhǎng)組(72.4％vs39.4％，P＜0.001);胃癌術(shù)后復(fù)發(fā)組CCR6的高表達(dá)的比例明顯高于無術(shù)后復(fù)發(fā)組(70.5％vs43.5％P＜0.001);而與年齡、性別、腫瘤大小、淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移、TNM分期、腫瘤分化程度和靜脈癌栓等無關(guān)(P＞0.005)。
　　結(jié)果:CCR6在胃癌組織中的表達(dá)明顯高于正常胃粘膜組織(P＜0.001

8、)，CCR6的高表達(dá)與胃癌侵及漿膜或漿膜外生長(zhǎng)以及術(shù)后復(fù)發(fā)緊密相關(guān)連((P＜0.001)。
　　結(jié)論:
　　1、我們的研究第一次證明高CCR6的表達(dá)與胃癌侵潤(rùn)漿膜或漿膜外生長(zhǎng)和術(shù)后復(fù)發(fā)緊密相關(guān)。
　　2、CCR6有可能成為判斷胃癌患者預(yù)后的一種新的標(biāo)志物。
　　第二部分 CCR6的表達(dá)對(duì)胃癌患者OS和DFS的影響
　　目的：
　　探討CCR6表達(dá)水平對(duì)胃癌患者總體生存率(overall surviva

9、l，OS)和無病生存率(Disease-free survival，DFS)的影響，進(jìn)一步明確CCR6在判斷胃癌患者預(yù)后中的價(jià)值。
　　一、分析CCR6表達(dá)水平對(duì)總體生存率和無病生存率的影響，評(píng)價(jià)對(duì)胃癌預(yù)后的價(jià)值
　　方法:
　　設(shè)計(jì)思路:胃癌TNM和PTNM分期差、淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移和組織分化程度低是影響胃癌預(yù)后的關(guān)鍵因素，為了排除上述因素對(duì)CCR6影響預(yù)后的干擾，分別檢測(cè)腫瘤PTNM分期、淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移、腫瘤分化程、腫瘤

10、侵潤(rùn)深度組的CCR6的表達(dá)水平，分為高表達(dá)組和低表達(dá)組，再比較CCR6高、低表達(dá)對(duì)胃癌生存率的影響。比較完成后再匯總?cè)繕?biāo)本，按CCR6表達(dá)水平，分為高CCR6組與低CCR6組，再次檢驗(yàn)分析CCR6高、低表達(dá)組對(duì)胃癌生存率的影響。
　　采用Kaplan-Meier方法分析總體生存率(overall survival，OS)和無病生存率(Disease-free survival，DFS)，并應(yīng)用log-rank檢驗(yàn)比較生存差異。<

11、br>　　結(jié)果:
　　372例胃癌患者中CCR6高表達(dá)組比低表達(dá)組的無病生存期(49.2:69.7個(gè)月，log-rank檢測(cè)P＜0.001)和總生存期(50.5:72.1個(gè)月，P＜0.001)明顯縮短。
　　胃癌Ⅱ期組:CCR6高表達(dá)組比低表達(dá)組OS明顯縮短(P=0.020;Fig.4b)。
　　胃癌Ⅲ期組:CCR6高表達(dá)組比低表達(dá)組OS明顯縮短(P＜0.001;Fig.4c)。
　　T3/T4期腫瘤:CCR6高

12、表達(dá)組比低表達(dá)組OS明顯縮短(P＜0.001;Fig.4g)。
　　淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組:CCR6高表達(dá)組比低表達(dá)組OS明顯縮短(P＜0.001;Fig.4h)。
　　低分化和未分化胃癌組:CCR6高表達(dá)組比低表達(dá)組OS明顯縮短(P＜0.001;Fig.4i)。
　　然而在Ⅰ期胃癌(P=0.162;Fig.4a)、T1/T2腫瘤(P=0.281;Fig.4d)、淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移(P=0.305;Fig.4e)和高/中分化的胃癌細(xì)胞

13、組(P=0.119;Fig.4f)，CCR6高表達(dá)組和低表達(dá)組的生存期無明顯差異。
　　結(jié)論:CCR6高表達(dá)的患者比低表達(dá)的患者顯示了顯著的縮短的總生存期，可以作為判斷預(yù)后的因子。
　　二、影響胃癌預(yù)后的多因素COX分析
　　方法:
　　COX回歸單因素分析胃癌患者臨床特特征，包括年齡、性別、病理分級(jí)、脈管癌栓、胃癌組織學(xué)分級(jí)、胃癌分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、胃癌CCR6的表達(dá)等對(duì)胃癌患者生存期的影響，再將上述有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

14、的因素納入COX比例風(fēng)險(xiǎn)模型，進(jìn)一步用多變量檢測(cè)影響胃癌患者生存期的因素，從而判斷CCR6表達(dá)水平對(duì)判斷預(yù)后價(jià)值。
　　結(jié)果:
　　1、單變量分析結(jié)果顯示:
　　胃癌無漿膜外擴(kuò)展組的總生存期和無病生存率明顯高于胃癌漿膜外擴(kuò)展組(P=0.001)。
　　T1/2的總生存期和無病生存率明顯高于T3/4(P＜0.001)。淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移組的總生存期和無病生存率明顯高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(P＜0.001)。
　　CCR6低

15、表達(dá)組的總生存期和無病生存率明顯高于CCR6高表達(dá)組(P=0.016)。
　　然而年齡、性別、脈管癌栓、組織學(xué)分級(jí)對(duì)總生存期和無病生存率影響，無差別。
　　結(jié)果提示:CCR6的表達(dá)水平和胃癌大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、胃癌漿膜外擴(kuò)展一樣，都是影響預(yù)后的因素。
　　2、以上有意義的臨床因素進(jìn)一步用多變量檢測(cè)，結(jié)果顯示:
　　T1/2的總生存期和無病生存率明顯高于T3/4(P＜0.001)。
　　淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移組的總生存期

16、和無病生存率明顯高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(OS:P=0.005、DFS:P=0.009)。
　　CCR6低表達(dá)組的總生存期和無病生存率明顯高于CCR6高表達(dá)組(OSP0＜.016、DFS P=0.005)。
　　而胃癌無漿膜外擴(kuò)展組與胃癌漿膜外擴(kuò)展組對(duì)總生存期和無病生存率的影響無差異(OS:P=0.583、DFS:P=0.470)。
　　結(jié)果進(jìn)一步提示:CCR6的表達(dá)和腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移一樣，都是胃癌獨(dú)立的預(yù)后因素。