格列喹酮血藥濃度測定及其分散片的人體生物等效性研究.pdf

1、目的：格列喹酮(Gliquidone)是第二代磺酰脲類口服降血糖藥。本課題旨在建立健康人血漿中格列喹酮的液相色譜-質譜(LC-MS/MS)測定方法，并進行格列喹酮片（糖適平）與格列喹酮分散片在中國健康受試者體內(nèi)的藥代動力學和生物等效性研究。
　　方法：以北京萬輝雙鶴藥業(yè)有限責任公司生產(chǎn)的格列喹酮片（糖適平）做參比制劑，采用兩制劑雙周期隨機交叉試驗設計，研究格列喹酮分散片的生物等效性。20例健康男性受試者空腹口服單劑量格列喹酮受試制

2、劑或參比制劑30 mg，于給藥前和給藥后0-24 h內(nèi)按設計的時間點采集血樣。血漿樣品中加入格列本脲為內(nèi)標，采用沉淀蛋白法進行處理，在Capcell PAK MG C18（50×4.6 mm I.D.，5μm）分析柱和C18（4×3.0 mm I.D.,5μm）保護柱上進行分離，以乙腈-水-甲酸=67:33:0.1為流動相，流速為0.80 ml/min；待測物采用串聯(lián)四級桿質譜，在電噴霧電離源（ESI）負離子模式下進行多反應監(jiān)測（MRM

3、），用于定量分析的離子反應分別為m/z526.2?m/z401.2（格列喹酮）和m/z492.1?m/z367.1（格列本脲），分析方法經(jīng)充分驗證后用于樣品測定。所得血藥濃度數(shù)據(jù)用 DAS2.1.1軟件進行統(tǒng)計學分析，受試制劑和參比制劑的Tmax用Wilcoxon非參數(shù)秩和檢驗進行統(tǒng)計學處理，Cmax和AUC經(jīng)對數(shù)轉換后進行方差分析，用雙向單側t-檢驗和[1-2α]置信區(qū)間法進行生物等效性評價。
　　結果：在5.00-1000 n

4、g·ml-1范圍內(nèi)，格列喹酮血漿濃度與峰面積具有良好線性關系，定量下限為5.00 ng·ml-1，典型回歸方程為：Y=0.0365X-0.00257(r=0.9992，n=7)。低、中、高3個濃度質控樣品（格列喹酮血漿濃度分別為10.0，100和800 ng·ml-1）的日內(nèi)RSD分別為7.2％、3.8%和3.3%，日間RSD分別為10.0%、7.0%和9.5%，準確度分別為97.5%、99.9%和100.4%，提取回收率分別為（73.

5、5±5.0）%、（84.8%±2.3）%和（81.7±4.4）%，內(nèi)標的提取回收率為（93.2±6.0）%。格列喹酮低、高濃度下的基質效應分別為94.7%和103.8%，相對標準差小于7.5%，內(nèi)標的基質效應分別為109.2%和105.6%，相對標準差小于4.2%。格列喹酮血漿樣品室溫放置6h、經(jīng)歷三次凍?融循環(huán)以及-70℃放置56天；均穩(wěn)定；處理后樣品置自動進樣器內(nèi)放置22 h穩(wěn)定。
　　按兩制劑雙周期交叉實驗設計，19名健康受

6、試者口服30 mg格列喹酮參比制劑或受試制劑，其主要藥動學參數(shù) Cmax分別為(773.1±224.1) ng·ml-1和(668.5±213.6)ng·ml-1；Tmax分別為(3.3±1.6) h和(3.1±1.0) h；AUC0-t分別為(4853.0±1600.7) ng·ml-1·h和(4428.8±1335.7) ng·ml-1·h；AUC0-∞分別為(5501.9±1903.0) ng·ml-1·h和(5227.6±247

7、3.9) ng·ml-1·h；t1/2分別為(8.9±7.2) h和(11.9±25.1) h。Tmax非參數(shù)秩和檢驗后結果顯示：受試制劑與參比制劑差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；Cmax、AUC0-t、AUC0-∞經(jīng)對數(shù)轉換后做方差分析，受試制劑與參比制劑差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。雙向單側t檢驗結果表明，格列喹酮受試制劑與參比制劑AUC0-t幾何均值比的90%置信區(qū)間為88.0%～96.0%，在80%～125%范圍內(nèi)；Cm

8、ax幾何均值比的90%置信區(qū)間為78.0%～94.4%，不在80%～125%范圍內(nèi)；以AUC0-t計算，受試制劑相對于參比制劑的生物利用度為(92.5±10.5)%。
　　結論：本文建立的血漿中格列喹酮的LC-MS/MS定量分析方法專屬性好，靈敏度高，精密準確，穩(wěn)定可靠，適用于格列喹酮分散片在健康人體中的藥代動力學和生物等效性的研究。
　　根據(jù)2015年《中國藥典》的生物等效性判斷標準，本研究測定的受試制劑格列喹酮分散片與參