尼克酰胺磷酸核糖轉移酶在膿毒癥小鼠免疫抑制中的作用.pdf

1、膿毒癥在嚴重創(chuàng)傷、感染和大手術病人中非常常見，治療困難，死亡率高。免疫抑制和繼發(fā)感染是目前膿毒癥患者主要死亡原因，其發(fā)生機制尚不清楚，缺乏有效治療措施。尼克酰胺磷酸核糖轉移酶（NAMPT）是一種多功能分子，它是一種促炎細胞因子，同時具有酶活性，是NAD補救生物合成的限速酶，調節(jié)多種細胞的能量代謝、分化與死亡等生命活動。已有研究顯示，NAMPT可促進膿毒癥炎癥反應和器官功能損害，但它在膿毒癥免疫抑制發(fā)生中的作用尚未見報道。
　　目的

2、：（1）探討NAMPT在膿毒癥免疫抑制發(fā)生中的作用；（2）了解NAMPT抑制劑FK866對膿毒癥小鼠死亡率和T細胞免疫反應的影響。
　　方法：（1）建立CLP（盲腸結扎穿孔）膿毒癥模型。（2）實驗動物分組：A：實驗組：NAMPT抑制劑FK866治療組；B：對照組：CLP+FK866溶媒組；C：假手術組。（3）CLP小鼠生存率監(jiān)測：各組動物（n=13~15）在手術后觀察10天，記錄小鼠生存情況。（4）ELISA檢測各小鼠血清細胞因子

3、水平。（5）流式細胞術檢測小鼠CD4+T細胞增殖能力和凋亡。（6）遲發(fā)型超敏反應（delayed-type hypersensitivity，DTH）在整體水平檢測小鼠T細胞功能。（7）免疫組織化學方法檢測小鼠脾臟及肝臟一氧化氮合成酶（ iNOS）水平。（8）流式細胞術（FCM）檢測MDSC及Treg細胞比例。
　　結果：（1）NAMPT抑制劑 FK866可顯著提高嚴重膿毒癥小鼠鼠的生存率（ p<0.05）。（2）同時，F(xiàn)K866

4、可顯著降低小鼠血循環(huán)中細菌數(shù)量，提示FK866可提高CLP小鼠對感染的抵抗力。（3）CLP后1d和3d，F(xiàn)K866治療組小鼠血清中細胞因子水平均較 CLP組為低。CLP后7d，F(xiàn)K866治療組小鼠血清TNF-α和TGF-β仍較CLP組低（p<0.05），但IFN-γ、IL-6、IL-10和 PGE2兩組間差異無統(tǒng)計學意義（p>0.05）。（4）FK866治療組 CLP小鼠 CD4+T細胞增殖較對照組（CLP+vehicle組）顯著增加（

5、p<0.05），凋亡則顯著減少（p<0.05）。（5）DTH實驗顯示，F(xiàn)K866治療組小鼠T細胞功能較對照組顯著提高（p<0.05）。（6）免疫組化檢測顯示，F(xiàn)K866治療組 CLP小鼠較對照組（CLP+vehicle組）肝臟和脾臟組織中 iNOS表達均顯著下調。（7）CLP后3d和7d，F(xiàn)K866治療組小鼠脾臟、骨髓和外周血中MDSC比例均較對照組（CLP+vehicle）顯著降低。但在CLP后1d，兩組差異無顯著意義（p>0.05）