慢性腦低灌注致認知受損大鼠海馬沉默突觸增加.pdf

1、目的:
　　CCH（Chronic cerebral hypoperfusion，慢性腦低灌注）是導(dǎo)致老年期認知功能障礙的重要病因，然而其發(fā)病機制目前仍未明確。本研究主要通過動態(tài)觀察CCH致大鼠學(xué)習(xí)記憶功能受損特點及規(guī)律，并量化分析海馬CA1沉默突觸數(shù)量及樹突棘密度變化的特點，探討CCH致大鼠認知功能受損相關(guān)突觸功能狀態(tài)改變機制。
　　方法:
　　將108只雄性SD大鼠隨機分為對照組(n=12×4)和模型組(n=15×

2、4)，同法各組再隨機分為4個亞組，分別為1周、4周、12周和24周組。通過BCCAO(permanentbilateral common carotid artery occlusion，永久性雙側(cè)頸總動脈阻斷)復(fù)制CCH大鼠模型。通過Morris水迷宮、ORT（object recognition test，物體辨別實驗）評估大鼠學(xué)習(xí)記憶能力。通過對AMPAR（α-amino-3-hydroxyl-5-methyl-4-isoxazo

3、le propionate receptors,α-氨基-3-羥基-5-甲基-4-異唑丙酸受體）和NMDAR(N-methyl-D-aspartic acidreceptors，N-甲基-D-天冬氨酸受體)及突觸素進行免疫熒光三標激光共聚焦顯微鏡觀察，量化分析沉默突觸數(shù)量變化特點;通過高爾基染色分析海馬CA1樹突棘密度變化特點。
　　結(jié)果:
　　1.物體辨別記憶受損出現(xiàn)于CCH模型構(gòu)建成功4周后，并持續(xù)到模型構(gòu)建后24周;模

4、型大鼠空間學(xué)習(xí)記憶及工作記憶受損出現(xiàn)于CCH模型構(gòu)建后1周，并持續(xù)到模型構(gòu)建后24周;
　　2.成年大鼠海馬CA1區(qū)存在約20％左右沉默突觸，表現(xiàn)為NMDAR1-突觸素共定位而缺乏GluR2（glutamate receptor2，谷氨酸受體2）表達（1周、4周、12周和24周對照組沉默突觸百分百分別為19.46±1.63％，20.19±1.31％，19.33±1.66％，19.95±1.11％);
　　3.量化分析不同時間

5、點海馬沉默突觸數(shù)量變化結(jié)果顯示，模型組沉默突觸的數(shù)量較對照組增加了29.81-55.08％（1周、4周、12周和24周模型組vs.對照組分別為:25.26±1.08％ vs.19.46±1.63％,29.43±1.52％ vs.20.19±1.31％,30.37±1.21％ vs.19.33±1.66％，29.48±1.34％ vs.19.95±1.11），組間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.001);與對照組相比模型組大鼠海馬CA1沉默突

6、觸絕對數(shù)量在4周、12周、24周組顯著增加(P＜0.001)，而功能突觸數(shù)量在4周組（3.50±0.74 vs.4.13±1.01，P=0.005）、12周組(3.22±0.72 vs.3.97±0.82,P＜0.001)、24周組（3.37±0.93 vs.4.50±1.17,P＜0.001）顯著降低，1周組無顯著差異（3.57±0.82 vs.4.13±1.25，P＞0.05）;
　　4.通過高爾基染色分析海馬CA1樹突棘密度

7、變化結(jié)果顯示，模型構(gòu)建后1周至24周模型組大鼠海馬CA1樹突棘密度較對照組顯著下降（1周至24周模型組vs.對照組分別為11.90±1.69 vs.13.46±2.42，9.83±1.93 vs.13.63±2.71，8.65±2.22 vs.13.25±2.82，8.85±2.00 vs.13.85±2.95，P＜0.001）;不同時間點模型組之間相比差異顯著(F(3,188)=20.038，P＜0.001)，組間比較說明模型構(gòu)建1周