香加皮杠柳苷與TRAIL聯(lián)合對胃癌細胞的作用及其機制的研究.pdf

1、目的：研究中藥香加皮化學成分杠柳苷單獨及與TRAIL聯(lián)合應用對胃癌細胞生長的影響，并探討其抗腫瘤機制，為其作為抗癌新藥開發(fā)提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　1、應用MTS法檢測香加皮杠柳苷及其與TRAIL聯(lián)合處理對胃癌細胞增殖的影響。
　　2、應用流式細胞術、TUNEL法和Hochest法檢測香加皮杠柳苷及其與TRAIL聯(lián)合能否誘導胃癌細胞凋亡。
　　3、應用Western blotting實驗檢測香加皮杠柳苷及其

2、與TRAIL聯(lián)合對細胞凋亡相關蛋白表達水平的影響。
　　4、應用吖啶橙染色、免疫熒光法檢測香加皮杠柳苷是否通過溶酶體凋亡途徑誘導胃癌細胞凋亡。
　　5、應用基因芯片篩選香加皮杠柳苷對胃癌細胞基因表達譜的影響，并用qPCR法進行驗證。
　　6、應用Western blotting實驗檢測香加皮杠柳苷及其與TRAIL聯(lián)合對胃癌細胞中ERK1/2通路及其下游EGR1分子表達水平的影響。
　　7、應用MTS法檢測香加皮杠

3、柳苷處理胃癌細胞后敲低EGR1對胃癌細胞增殖的影響。
　　8、應用 BALB/c裸鼠移殖瘤模型，檢測香加皮杠柳苷及其與 TRAIL聯(lián)合應用在體內對胃癌細胞增殖的影響。
　　9、應用TUNEL法檢測香加皮杠柳苷及其與TRAIL聯(lián)合在體內是否可誘導胃癌細胞凋亡。
　　10、應用免疫組化檢測香加皮杠柳苷及其與 TRAIL聯(lián)合應用在體內對p-ERK1/2、EGR1、Ki-67、Mcl-1、Bid、caspase-3、DR4、D

4、R5表達水平的影響。
　　結果：
　　1、MTS結果顯示，香加皮杠柳苷及其與TRAIL聯(lián)合可協(xié)同抑制胃癌細胞SGC-7901、MGC-803和BGC-823的增殖（P<0.05），且具有時間和劑量依賴性。
　　2、流式細胞術、TUNEL法和Hochest法結果均顯示，香加皮杠柳苷及其與TRAIL聯(lián)合可協(xié)同誘導胃癌細胞SGC-7901和MGC-803細胞凋亡（P<0.05）。
　　3、Western blottin

5、g實驗結果顯示，香加皮杠柳苷及其與TRAIL聯(lián)合可誘導胃癌細胞中Mcl-1、總Bid表達水平降低，caspase-3的裂解片段、DR4和DR5升高（P<0.05）。
　　4、吖啶橙染色和免疫熒光實驗結果顯示，香加皮杠柳苷可破壞胃癌細胞的溶酶體膜完整性，并有CathepsinB、CathepsinD釋放到細胞質。
　　5、基因芯片結果顯示，香加皮杠柳苷可升高胃癌細胞中 EGR1的表達。
　　6、Western blott

6、ing實驗結果顯示，香加皮杠柳苷及其與TRAIL聯(lián)合升高胃癌細胞中p-ERK1/2、EGR1的表達水平（P<0.05）。
　　7、MTS法結果顯示，香加皮杠柳苷處理胃癌細胞后再敲低EGR1，對胃癌細胞增殖的抑制作用有所下降（P>0.05）。
　　8、體內實驗結果顯示，香加皮杠柳苷及其與TRAIL聯(lián)合抑制胃癌移植瘤的生長（P<0.05）。
　　9、TUNEL法結果顯示，在裸鼠移植瘤組織中，香加皮杠柳苷及其與TRAIL聯(lián)合

7、可誘導胃癌細胞凋亡（P<0.05）。
　　10、免疫組化結果顯示，香加皮杠柳苷及其與TRAIL聯(lián)合可明顯升高胃癌細胞EGR1、p-ERK1/2、DR4和DR5表達水平，降低Mcl-1、pro-Bid、pro-caspase-3、Ki-67的表達水平。
　　結論：
　　1、香加皮杠柳苷及其與TRAIL聯(lián)合應用可通過協(xié)同誘導細胞凋亡抑制胃癌細胞的增殖。
　　2、香加皮杠柳苷可能是通過溶酶體途徑誘導細胞凋亡。