胃癌細胞來源的exosomes對間質干細胞作用及機制研究.pdf

1、目的:探討胃癌細胞來源的exosomes對人臍帶來源間質干細胞(humanum bilica lcordmesenchyma lstemcells,hucMSCs)的作用及其機制,研究腫瘤可以通過分泌exosomes的方式作用于腫瘤微環(huán)境細胞從而促進其自身的發(fā)展和轉移。
　　 方法:利用超濾及蔗糖密度梯度離心法從胃癌細胞(SGC7901和HGC27)培養(yǎng)上清中分離并純化exosomes,通過透射電鏡觀察形態(tài)和大小圾Western

2、-blot檢測exosomes標志性蛋白CD9、CD81對其進行鑒定;體外實驗將分離純化的腫瘤細胞來源的exosomes對人臍帶間質干細胞作用(hucMSCs),首先用激光共聚焦和免疫組化檢測觀察腫瘤exosomes在hucMSCs中的內化和定位。綜合運用細胞計數(shù)檢測腫瘤細胞exosomes對hucMSCs增殖的影響;劃痕試驗和transwell試驗檢測腫瘤細胞exosomes對hucMSCs遷移能力的影響;定量PCR(qRT-PCR)

3、、Westernblotting及免疫熒光等技術分析腫瘤細胞exosomes對hucMSCs的誘導分化作用及TGF-β信號通路在其中發(fā)揮的重要作用,探討腫瘤exosomes對MSCs生物學作用的機制。
　　 結果:采用超濾及梯度離心法成功分離純化得到腫瘤細胞分泌的exosomes,透射電子顯微鏡下觀察exosomes呈橢圓或碟狀的囊泡結構,直徑約30～100nm。腫瘤細胞來源的exosomes表達標志性蛋白CD9、CD81;胃癌

4、細胞來源的exosomes內化和定位于hucMSCs;胃癌細胞來源的exosomes作用后hucMSCs細胞數(shù)明顯增加且其遷移能力增加;實時熒光定量RT-PCR及Westernblot顯示在胃癌細胞來源exosomes作用下hucMSCs的CAFs標志性基因和蛋白FAP、α-SMA、Vimentin、N-Cadherin表達增加;胃癌細胞來源exosomes作用hucMSCs后,TGF-β通路中的磷酸化Smad2/3和p38均增加而總的

5、Smad2/3和p38沒有變化:TGF-βRI抑制劑SD208作用后Smad2/3和p38的活化表達受到抑制。說明胃癌細胞來源的exosomes在體外能促進hucMSCs的生長,促進其遷移且能誘導hucMSCs向CAFs的分化且TGF-β通路在此過程發(fā)揮重要作用,為研究腫瘤的發(fā)展和轉移提供新的思路。
　　 結論:采用超濾及梯度離心法可以成功從腫瘤細胞培養(yǎng)上清中分離純化exosomes。腫瘤細胞來源的exosomes在體外能夠腫瘤