小鼠骨髓間質(zhì)干細(xì)胞對巨噬細(xì)胞表型和功能的影響及機(jī)制.pdf

1、目的:間質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymalstemcells，MSCs)在組織再生、炎癥反應(yīng)及損傷修復(fù)中發(fā)揮重要作用。有研究表明MSCs對巨噬細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用在這些過程中十分關(guān)鍵，然而這種作用的機(jī)制仍不十分明確。本研究旨在探討小鼠骨髓MSCs在正常或脂多糖(LPS)刺激條件下對巨噬細(xì)胞的極化表型和功能的影響，并對相關(guān)機(jī)制進(jìn)行了初步研究，為進(jìn)一步探索MSCs的免疫調(diào)節(jié)和促損傷修復(fù)機(jī)制提供依據(jù)。
　　 方法:分離培養(yǎng)小鼠骨髓MSCs，體

2、外與小鼠巨噬細(xì)胞株RAW264.7或磁珠分選的小鼠脾臟CD11b陽性單核/巨噬細(xì)胞間接共培養(yǎng)，LPS作為刺激因素，qRT-PCR及ELISA方法檢測巨噬細(xì)胞M1/M2相關(guān)因子表達(dá)水平（TNF-α、IL-6、IL-10、Arg-1）;流式細(xì)胞術(shù)及免疫熒光技術(shù)檢測RAW264.7細(xì)胞M2標(biāo)記CD206的表達(dá)情況;細(xì)胞計(jì)數(shù)和MTT實(shí)驗(yàn)研究MSC條件培養(yǎng)基(MSC-CM)對RAW264.7細(xì)胞增殖能力的影響;Tranwell遷移實(shí)驗(yàn)研究MSCs

3、對RAW264.7細(xì)胞遷移功能的影響。此外，采用Westernblot方法研究MSC-CM對RAW264.7細(xì)胞M1/M2相關(guān)信號通路NF-κB和STAT3的影響。
　　 結(jié)果:MSCs間接接觸或上清作用于RAW264.7細(xì)胞，降低了M1型細(xì)胞因子TNF-α基因水平而升高了M2型相關(guān)基因IL-10、Arg-1表達(dá)水平。ELISA結(jié)果顯示MSC-CM能使RAW264.7細(xì)胞IL-6分泌水平降低，而使IL-10分泌水平增高。MSCs

4、培養(yǎng)上清在LPS存在的條件下能降低脾臟單核/巨噬細(xì)胞TNF-α表達(dá)水平，增高Arg-1表達(dá)水平。流式細(xì)胞術(shù)及免疫熒光結(jié)果顯示MSC-CM增加了RAW264.7細(xì)胞M2型標(biāo)記CD206表達(dá)。同時(shí)，細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果表明MSC-CM作用組與對照組相比能增加RAW264.7細(xì)胞數(shù)量，MTT實(shí)驗(yàn)也證實(shí)了這一結(jié)果。在有或無LPS刺激的條件下，MSCs能顯著增加RAW264.7細(xì)胞的遷移數(shù)量。Westernblot結(jié)果顯示，MSC-CM抑制LPS誘導(dǎo)的N

5、F-κB活化，降低NF-κBp65入核及磷酸化p65表達(dá)量，抑制下游炎性基因IL-1β和TNF-α的表達(dá)水平。另一方面MSC-CM增加了JAK1和STAT3磷酸化蛋白表達(dá)水平。此外，STAT3信號抑制劑S31-201，抑制了MSC-CM對巨噬細(xì)胞IL-10和Arg-1基因表達(dá)的增強(qiáng)作用。
　　 結(jié)論:小鼠骨髓MSCs能通過間接接觸或培養(yǎng)上清作用促進(jìn)巨噬細(xì)胞由M1型向M2型轉(zhuǎn)化，同時(shí)增加RAW264.7細(xì)胞的增殖和遷移能力。MSC