Egfl8調(diào)控肝癌侵襲轉(zhuǎn)移的機(jī)制研究.pdf

1、肝細(xì)胞癌（Hepatocellular Carcinoma，HCC）是臨床上常見的惡性腫瘤之一，已成為全球第六大常見和第二大致死率的惡性腫瘤，其在我國則為第三大常見的惡性腫瘤，嚴(yán)重威脅我國人民的生命健康。盡管現(xiàn)階段肝癌手術(shù)切除率已明顯提高，但以5年生存率衡量，肝細(xì)胞癌的整體治療水平仍無顯著改善。究其原因，主要在于肝細(xì)胞癌術(shù)后的高復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率。顯然，抑制肝癌的侵襲轉(zhuǎn)移能力以降低肝癌術(shù)后的高復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率是目前肝癌治療面臨的重點(diǎn)和關(guān)鍵問題。

2、>　　經(jīng)過幾十年的研究，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)nm23，KAI-1，OPN等一批在HCC侵襲轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用的因子。我們前期的研究也已發(fā)現(xiàn) Egfl7可通過 Egfl7/EGFR/FAK信號(hào)通路促進(jìn)HCC的侵襲轉(zhuǎn)移能力。Egfl8（epidermal growth factor-like domain8，表皮生長因子樣結(jié)構(gòu)域8）是Egfl7的同源基因，兩者均為Egfl基因家族成員。Egfl8基因編碼蛋白與Egfl7編碼基因蛋白具有極為相似的蛋白質(zhì)結(jié)

3、構(gòu)，兩者均是分泌型蛋白，都包含有一個(gè) EGF樣結(jié)構(gòu)域，一個(gè)鈣離子結(jié)合型 EGF樣結(jié)構(gòu)域和 N尾端的信號(hào)肽。因此我們認(rèn)為兩者蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)上的一致性強(qiáng)烈提示 Egfl8可能和 Egfl7一樣在人類惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮作用。近年來我們已證實(shí) Egfl8在人結(jié)直腸癌及胃癌組織中的表達(dá)明顯下調(diào)，且其低表達(dá)與結(jié)直腸癌及胃癌的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、TNM分期及不良預(yù)后密切相關(guān)。但 Egfl8在 HCC組織中的表達(dá)水平及其功能目前尚未見研究報(bào)道。
　　目的

4、:分析 Egfl8在 HCC組織、肝癌細(xì)胞系中的表達(dá)水平及其與 HCC臨床病理特征的相關(guān)性，并進(jìn)而研究Egfl8在肝癌細(xì)胞的增殖、凋亡、侵襲及運(yùn)動(dòng)能力等方面的作用。
　　方法:收集34例手術(shù)切除的新鮮肝癌標(biāo)本及其對(duì)應(yīng)的癌旁正常肝臟組織標(biāo)本，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測Egfl8基因在這些組織標(biāo)本、正常肝細(xì)胞系及3腫肝癌細(xì)胞系中的表達(dá)水平，并分析 Egfl8基因表達(dá)水平與 HCC各項(xiàng)臨床病理特征之間的相關(guān)性。進(jìn)而，我們采用慢病毒介

5、導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)導(dǎo)技術(shù)，構(gòu)建Egfl8過表達(dá)的HCCLM3肝癌細(xì)胞，以Western blot法檢測 Egfl8蛋白表達(dá)水平的變化，并分別采用 MTT法、Annexin V-APC染色法、Transwell侵襲小室法及劃痕實(shí)驗(yàn)觀察該細(xì)胞在增殖、凋亡、侵襲及運(yùn)動(dòng)能力等方面的變化。
　　結(jié)果:實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果顯示，Egfl8基因在67.6％（23/34）的肝癌組織中表現(xiàn)為低表達(dá)，且 Egfl8在癌組織中的表達(dá)高于癌旁組織（0.008±

6、0.02比0.194±0.05，P=0.04）。同時(shí)，Egfl8表達(dá)下調(diào)與肝癌的靜脈侵犯（P=0.01）及TNM分期（P=0.00）密切相關(guān)。此外，Egfl8在肝癌細(xì)胞系中的表達(dá)水平也明顯低于正常肝細(xì)胞系（P<0.05），且其在高侵襲轉(zhuǎn)移潛能肝癌細(xì)胞系中的表達(dá)低于低侵襲轉(zhuǎn)移潛能的肝癌細(xì)胞系（P<0.05）。慢病毒介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)導(dǎo)技術(shù)成功構(gòu)建了Egfl8過表達(dá)的HCCLM3肝癌細(xì)胞，過表達(dá)組細(xì)胞中Egfl8蛋白的表達(dá)水平較對(duì)照組明顯上升（0

7、.853比0.254，P<0.001）。與對(duì)照組細(xì)胞相比。Egfl8過表達(dá)組肝癌細(xì)胞的凋亡率明顯上升（10.05±0.26%比7.28±0.31%，P<0.001），細(xì)胞侵襲能力（Transwell小室轉(zhuǎn)移率：1.815±0.019比3.732±0.061，P<0.001）和遷移能力均明顯降低（24h遷移率：0.03±0.00比0.17±0.04，P=0.021；72h遷移率：0.23±0.03比0.36±0.05，P=0.028），提

8、示過表達(dá) Egfl8基因可抑制肝癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移。而MTT法描繪的增殖曲線則顯示，Egfl8過表達(dá)組 HCCLM3細(xì)胞的增殖無顯著變化，提示Egfl8基因?qū)Ω伟┘?xì)胞的增殖無明顯影響。
　　結(jié)論:Egfl8在HCC組織及肝癌細(xì)胞系中表達(dá)下調(diào)，其表達(dá)下調(diào)與肝癌的惡性程度及侵襲轉(zhuǎn)移潛能密切相關(guān)。Egfl8的過表達(dá)促進(jìn)了肝癌細(xì)胞的凋亡，抑制了肝癌細(xì)胞的侵襲及遷移能力，而對(duì)其增殖能力無明顯影響，提示 Egfl8可作為一種反映 HCC惡性程度