兩種海洋抗氧化肽預(yù)防UVB致小鼠皮膚癌的效應(yīng)及可能機(jī)理研究.pdf

1、目的：建立模擬日光紫外線(xiàn)B（180mJ/cm2）長(zhǎng)期照射昆明種無(wú)毛小鼠皮膚癌的模型，從AQP3，AQP9，EGFR，AKT的分子角度，研究扇貝多肽（PCF）和狹鱈魚(yú)皮膠原蛋白肽（CPWPS）對(duì)UVB輻射誘導(dǎo)致皮膚癌的預(yù)防作用。
　　方法： CCK-8法檢測(cè)不同濃度（50，100，200，300，500，1000，2000mg·L-1）的CPWPS對(duì)HaCaT細(xì)胞的毒性，篩選其對(duì)HacaT細(xì)胞的無(wú)毒性作用劑量，將PCF和CPWPS無(wú)

2、毒性劑量作用于表皮鱗癌細(xì)胞A431，同法檢測(cè)細(xì)胞存活率。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)分組：正常對(duì)照組、模型組、5％VC組，5%PCF組，5%CPWPS組，20%CPWPS組。除正常對(duì)照組外其他各組均進(jìn)行180mJ/cm2 UVB誘導(dǎo)，每個(gè)周照射3次共照射25周，建立皮膚癌的模型；肉眼觀察，HE染色法探究5，10，15，20，25周的昆明種無(wú)毛小鼠的皮膚病理改變。采用免疫組化的方法檢測(cè)25周時(shí)模型組和正常組PCNA的表達(dá)量及各組AQP3，AQP9，EGFR，

3、P-AKT的蛋白表達(dá)量。
　　結(jié)果：細(xì)胞水平：CPWPS濃度高于300mg·L-1時(shí)對(duì)HaCaT細(xì)胞有毒性作用(P<0.05)。選取50,100,200mg·L-1的CPWPS和1.42，2.48，5.68mmol·L-1的PCF作用于表皮鱗癌A431細(xì)胞時(shí)，并未抑制細(xì)胞增殖（P>0.05)，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。動(dòng)物水平：肉眼觀察到隨著持續(xù)的UVB照射，模型組第5周無(wú)毛鼠的皮膚出現(xiàn)紅斑，長(zhǎng)鱗屑，第10周，脫屑，掉毛，第15周開(kāi)始出現(xiàn)帽針

4、尖大小丘疹，第20周丘疹進(jìn)一步增多，第25周形成腫瘤；同時(shí)期5%PCF組，20%CPWPS組較模型組均有不同程度的癥狀減輕。海洋抗氧化肽3組出現(xiàn)腫瘤的時(shí)間均比陽(yáng)性對(duì)照組晚，且25周時(shí)平均每只老鼠背部腫瘤個(gè)數(shù)較VC組少，尤其是20%CPWPS組平均每只無(wú)毛鼠背部?jī)H出現(xiàn)1.80±0.45個(gè)腫瘤（P<0.05)。HE的光鏡結(jié)果顯示，正常組昆明種無(wú)毛小鼠皮膚組織表皮層較有毛小鼠薄，毛囊及汗腺較有毛小鼠少，其他均無(wú)不同。UVB照射5周后，模型組無(wú)

5、毛小鼠皮膚表皮層較非UVB照射組變厚；照射10周后，表皮角化過(guò)度，表皮突不規(guī)則輕度向下延伸；照射15周后，角化過(guò)度更加明顯，開(kāi)始出現(xiàn)癌巢；照射20周后，角化過(guò)度相對(duì)15周進(jìn)一步明顯，癌巢增多，黑色素輕微沉積，核漿比增大，突破基底層浸潤(rùn)，細(xì)胞排列較亂，異型性；照射25周后，高度的角化過(guò)度，彌漫的異型性細(xì)胞，癌巢進(jìn)一步增多且明顯，部分伴有鱗癌角珠。免疫組化結(jié)果顯示模型組的PCNA蛋白表達(dá)量明顯高于正常組（P<0.05)，綜合以上結(jié)果顯示無(wú)毛

6、鼠皮膚癌模型構(gòu)建成功。而同時(shí)期各給藥組較模型組均有不同程度的癥狀減輕。與正常組相比，模型組AQP3,AQP9,EGFR,P-AKT蛋白表達(dá)水平明顯升高（P<0.05)；與模型組相比，5%PCF組，5%CPWPS組，20%CPWPS組，5%VC各給藥組中AQP3，AQP9，EGFR，P-AKT蛋白表達(dá)水平均降低（P<0.05)，且20%CPWPS組各蛋白表達(dá)水平均降低的最為顯著（P<0.05)。
　　結(jié)論：新發(fā)現(xiàn)AQP9與EGFR,