果膠酶的分離純化和癌胚抗原在乳酸菌表面的展示.pdf

1、一、產(chǎn)果膠酶菌株的篩選
　　 從煙葉中分離到9株產(chǎn)果膠酶菌株，通過測(cè)定酶活和不同pH值下果膠酶的穩(wěn)定性，篩選到一株高產(chǎn)果膠酶菌株，通過16SrDNA測(cè)序測(cè)定及序列比對(duì)，鑒定為Bacillussubtilis。通過測(cè)定該菌株的產(chǎn)酶曲線，發(fā)現(xiàn)該菌在培養(yǎng)16h時(shí)酶活最高，且最適pH為10，為堿性果膠酶。同時(shí)還測(cè)定了該菌的酶系組成，發(fā)現(xiàn)該菌有較高的淀粉酶酶活，酶活為45U/mL。
　　 二、培養(yǎng)基的優(yōu)化和堿性果膠酶的純化

2、　　 通過優(yōu)化產(chǎn)果膠酶培養(yǎng)基的氮源、碳源和無機(jī)鹽離子，確定最終的培養(yǎng)基配方為1％(v/v)豆餅，10％(v/v)麥芽汁和0.3％(v/v)CaCl2，將果膠酶酶活提高了9倍，達(dá)到690U/mL，這么高的酶活和經(jīng)濟(jì)的培養(yǎng)基為工業(yè)應(yīng)用提供了可能。為了探索酶的特性，通過離子交換層析分離到了純度較高的果膠酶蛋白組分，SDS-PAGE分析，該酶的分子量約為44kD。
　　 三、利用表面展示系統(tǒng)表達(dá)癌胚抗原
　　 乳酸菌是一類可發(fā)

3、酵可溶性碳源的革蘭氏陽(yáng)性菌，因?yàn)槠涫称钒踩?jí)的地位，使其成為了很好的疫苗載體，其中乳酸乳球菌是乳酸菌的模式菌。本論文中，利用LactobacilluscrispatusK2-4-3的S層蛋白的C端序列(LcsB)作為細(xì)胞壁的錨定域，構(gòu)建了乳酸乳球菌的表面展示系統(tǒng)。為了驗(yàn)證這種表面展示系統(tǒng)作為口服疫苗的潛在應(yīng)用，將癌胚抗原(carcinoembryonicantigen，CEA)與靶向表面展示系統(tǒng)錨定域連接后，利用SDS-PAGE和Wes