雙水相萃取果膠酶的研究.pdf

1、雙水相萃取技術(shù)是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一種新型的生化分離技術(shù)，該技術(shù)具有生物相容性大，分離條件溫和，分離步驟簡(jiǎn)單，易于放大，且不存在有機(jī)溶劑殘留等優(yōu)點(diǎn)。已經(jīng)廣泛用于各類酶、核酸、生長(zhǎng)激素及各種植物中有效成分的提純。 本文首先對(duì)果膠酶活性的測(cè)定方法進(jìn)行了比較研究，試驗(yàn)證明，次碘酸鈉法測(cè)定果膠酶活性數(shù)值受外界影響誤差較大，故采用DNS比色法進(jìn)行果膠酶活力的測(cè)定，這種方法減少了誤差，試驗(yàn)數(shù)據(jù)可靠，測(cè)定到的酶活力穩(wěn)定。因此，DNS比色法是果膠

2、酶活力測(cè)定的較好方法。同時(shí)確定了果膠酶活力與稀釋倍數(shù)的關(guān)系，在試驗(yàn)中，上相選取稀釋倍數(shù)在500左右，下相選取稀釋倍數(shù)在400左右。 本文研究了構(gòu)造雙水相體系的成相組分及不同操作條件對(duì)果膠酶活性的影響；不同稀釋倍數(shù)對(duì)果膠酶活力的影響；果膠酶在PEG/(NH<,4>)<,2>SO<,4>雙水相體系中的分配行為及影響果膠酶分配的因素；在PEG/(NH<,4>)<,2>SO<,4>雙水相中研究不同PEG分子量、PEG濃度、(NH<,4>

3、)<,2>SO<,4>濃度、pH、溫度等因素對(duì)果膠酶在兩相中的分配系數(shù)的影響。 試驗(yàn)表明，不同稀釋倍數(shù)下的果膠酶活力不同；不同分子量的聚乙二醇(PEG)以及在雙水相成相濃度范圍內(nèi)，PEG1000對(duì)果膠酶活性影響不大，保持活力最高；在選定的濃度范圍，(NH<,4>)<,2>SO<,4>對(duì)果膠酶活性無(wú)顯著影響。在以下的試驗(yàn)條件下獲得了較高的分配系數(shù)：PEG平均分子量1000，濃度27％，(NH<,4>)<,2>SO<,4>濃度19％

4、，pH為5.0，50℃，其分配系數(shù)達(dá)到12.65。 此外，對(duì)聚乙二醇相中果膠酶的反萃取進(jìn)行了研究，考察不同濃度酒石酸鉀鈉對(duì)上相果膠酶分配系數(shù)的影響，試驗(yàn)表明，在聚乙二醇/硫酸銨雙水相系統(tǒng)中，控制聚乙二醇的百分含量為27％，硫酸銨的百分含量為19％，酒石酸鉀鈉百分含量為20％，pH為5.0，室溫下，反萃取聚乙二醇/酒石酸鉀鈉雙水相體系的分配系數(shù)可以達(dá)到最大值，K=5.0。經(jīng)過反萃取后，果膠酶大部分集中在下相(水相)中，其分配系數(shù)為