尿路上皮癌胚抗原1(UCA1)對口腔鱗癌細胞生物學功能影響的實驗研究.pdf

1、【目的】口腔鱗狀細胞癌是口腔頜面部最常見的惡性腫瘤，口腔癌患者的5年生存率一直為50％左右，大部分患者多因腫瘤的侵襲和轉移而導致死亡。伴隨著全基因組和轉錄組測序技術的發(fā)展，長鏈非編碼RNA日益受到關注，許多研究已經(jīng)表明LncRNA(Long non-coding RNA)不僅僅是從DNA到蛋白質之間的中間產物，而且很多時候是作為一個具有細胞調節(jié)功能的重要角色，參與到生物生長發(fā)育的過程中。因此，研究口腔癌侵襲相關基因是目前的熱點問題。大量

2、的研究表明， LncRNA的異常表達與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關。但目前的研究尚屬對UCA1在口腔中組織形態(tài)學的研究，而對其在口腔癌中的具體分子機制仍未涉及。因此，對 LncRNA RNA UCA1(urothelial cancer associated1)對口腔癌細胞系Scc15和Cal27生物學功能的一些影響進行探討，為口腔鱗癌早期診斷、治療，研制新的基因靶向藥物提供重要的實驗線索和依據(jù)。
　　【方法】以Scc15和Cal27

3、口腔鱗癌細胞系為研究對象，通過將UCA1-siRNA轉入細胞中，探討沉默LncRNA RNA UCA1后對細胞的生物學功能的影響。采用qRT-PCR方法驗證UCA1-siRNA的干擾效果；通過Western Blot檢測兩組中MMP-9蛋白的表達水平；運用劃痕實驗及Transwell實驗研究兩組細胞侵襲及遷移能力的改變；通過CCK-8實驗、Hoechst33258染色和流式細胞學分析檢測其細胞增殖、凋亡的情況；采用細胞免疫熒光實驗檢測上

4、述兩組細胞中β-catenin蛋白的改變。所得試驗數(shù)據(jù)以-x±S-x表示，并采用SPSS20.0統(tǒng)計軟件進行t檢驗和卡方檢驗分析。
　　【結果】qRT-PCR結果顯示：與control組相比，Scc15細胞干擾組UCA1表達水平下降近90%，而Cal27細胞干擾組下降值為85。Western Blot檢測結果發(fā)現(xiàn)：兩組細胞干擾組中MMP-9蛋白表達水平均較control組下降。劃痕實驗結果顯示：在劃痕24 h后，干擾組較contr

5、ol-siRNA組劃痕遷移細胞的數(shù)量及劃痕愈合的速度明顯下降。Transwell遷移實驗結果顯示：兩組細胞control-siRNA組穿過小室的細胞數(shù)目顯著高于干擾組，Scc15對照組與干擾組遷移與侵襲穿膜細胞分別為437.2±54.75個（n=5）和145.8±23.31個(n=5)；Cal27的對照組與干擾組遷移穿膜細胞分別為719.2±92.36個（ n=5）和208.0±25.58個（ n=5）。Transwell侵襲實驗結果顯

6、示：兩組細胞control-siRNA組穿過小室的細胞數(shù)目顯著高于干擾組，Scc15對照組與干擾組遷移與侵襲穿膜細胞分別為437.2±54.75個（ n=5）和145.8±23.31個(n=5)；Cal27的對照組與干擾組侵襲穿膜細胞分別為363.4±45.96個和164.8±24.68個(n=5)。CCK-8實驗結果發(fā)現(xiàn)：隨著細胞生長時間的延長，Scc15和Cal27細胞干擾組與control-siRNA組比較細胞增殖能力下降。Hot

7、chest33258染色結果顯示，兩組細胞干擾組與control-siRNA組比較，凋亡的細胞均明顯較多。流式細胞術分析結果發(fā)現(xiàn)：兩組細胞的干擾組較control-siRNA對照凋亡率分別為18.54%和1.45%（Scc15，p=0.0175),11.24%和4.43%（Cal27， p=0.0019)。細胞免疫熒光實驗結果發(fā)現(xiàn)，兩組細胞的干擾組胞核中的β-catenin蛋白從胞核中移出至胞漿，并且總的β-catenin蛋白在細胞中的