GollI-MBP影響T細(xì)胞與口腔黏膜組織細(xì)胞生物學(xué)功能的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:研究少突膠質(zhì)細(xì)胞譜系基因-髓鞘堿性蛋白(Genes of the Oligodendrocytelineage-Myelin Basic Protein，Golli-MBP)對T細(xì)胞胞內(nèi)Ca2+及凋亡、增殖能力的影響，初步嘗試建立口腔扁平苔蘚(Oral lichen planus，OLP)動(dòng)物模型，從而為進(jìn)一步研究OLP等免疫相關(guān)性疾病的病因及發(fā)病機(jī)制打下基礎(chǔ)。
　　方法: Golli-MBP過表達(dá)慢病毒載體感染Jurkat

2、細(xì)胞，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative real time PCR，qPCR)和免疫蛋白印記技術(shù)(western blot，WB)分析Golli-MBP mRNA及蛋白表達(dá)情況;CCK-8法和AnnexinⅤ/FITC7-AAD雙熒光染色分別檢測Jurkat細(xì)胞增殖能力、凋亡能力;采用鈣離子熒光探針Fluo-3檢測Jurkat細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度變化;Golli-MBP過表達(dá)慢病毒載體注射于敘利亞金黃地鼠頰囊黏膜下，HE染

3、色觀察敘利亞金黃地鼠口腔黏膜組織結(jié)構(gòu)改變;免疫組化法觀察敘利亞金黃地鼠口腔黏膜組織中增殖細(xì)胞核抗原(proliferating cellnuclear antigen，PCNA)的表達(dá);TUNEL法觀察敘利亞金黃地鼠口腔黏膜組織細(xì)胞凋亡情況。
　　結(jié)果: Golli-MBP過表達(dá)慢病毒載體成功感染Jurkat細(xì)胞，感染后Jurkat細(xì)胞Golli-MBP mRNA及蛋白表達(dá)升高;Golli-MBP OE組Jurkat細(xì)胞增殖能力顯

4、著下降(p＜0.01)，凋亡能力也明顯下降(p＜0.01); Golli-MBP OE組鈣離子內(nèi)流顯著減小(p＜0.01);Golli-MBP未能誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物口腔黏膜產(chǎn)生肉眼可見的OLP病損變化;HE染色未見OLP特征性組織學(xué)結(jié)構(gòu)改變;7天實(shí)驗(yàn)組上皮層細(xì)胞凋亡率與對照組無明顯差異(p＞0.05)，14天實(shí)驗(yàn)組上皮層細(xì)胞凋亡率低于對照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05);7天及14天實(shí)驗(yàn)組上皮層細(xì)胞增殖率低于對照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(