高壓氧對大鼠腎移植后缺血再灌注腎組織粘附分子、Th17細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞以及C3表達(dá)的影響.pdf

1、目的：通過建立同系大鼠腎移植缺血再灌注損傷(ischemia reperfusion injury，IRI)模型，觀察粘附分子（ICAM-1、VCAM-1）、C3、IL-17（Th17細(xì)胞標(biāo)志物）和ED1（單核巨噬細(xì)胞標(biāo)志物）在移植腎組織中的表達(dá)變化以及高壓氧(hyperbaric oxygenation， HBO)治療對其表達(dá)的影響，進(jìn)一步研究腎IRI發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制以及高壓氧對腎IRI的治療作用和機(jī)制。
　　方法：將SD大鼠

2、隨機(jī)分為腎移植組、腎移植﹢HBO治療組（簡稱HBO治療組）及假手術(shù)組，每組又分為1h、3h和5h組（每組n=6）。腎移植組僅行腎移植手術(shù)， HBO治療組于再灌注后0h、2h和4h分別將腎移植術(shù)后的大鼠置于動物實(shí)驗(yàn)氧艙內(nèi)予以HBO治療1h，假手術(shù)組僅切除右腎，不做腎移植手術(shù)。于腎移植后1h、3h和5h處死腎移植組和HBO治療組大鼠，留取移植腎組織和血標(biāo)本，假手術(shù)組也于術(shù)后相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)處死大鼠并留取左腎組織和血標(biāo)本。采用HE染色觀察腎組織的病

3、理改變，免疫組化法檢測 ICAM-1、VCAM-1、C3、ED1、IL-17蛋白的表達(dá)，實(shí)時(shí)熒光定量PCR（real-time PCR）檢測ICAM-1和C3 mRNAs的表達(dá)以及全自動生化分析儀檢測血清肌酐(SCr)。
　　結(jié)果：
　　1.腎功能變化：在再灌注1h、3h、5h時(shí)，與假手術(shù)組比較，腎移植組和 HBO治療組SCr值均顯著增高(P<0.05)；與腎移植組比較，HBO治療組在1h、3h時(shí)無明顯差異，在5h時(shí)SCr值

4、則明顯降低(P<0.05)。腎移植組和HBO治療組內(nèi)SCr值隨時(shí)間延長逐漸升高（P<0.05）。假手術(shù)組內(nèi)，各時(shí)間點(diǎn)SCr值無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。
　　2.腎組織病理變化：HE染色發(fā)現(xiàn)，假手術(shù)組各時(shí)間點(diǎn)腎組織結(jié)構(gòu)正常，各時(shí)間點(diǎn)對比無明顯變化。腎移植組隨再灌注時(shí)間延長組織損傷加重，可見腎小管管腔擴(kuò)張，上皮細(xì)胞腫脹，腎小球體積增大，逐漸可見蛋白樣管型、紅細(xì)胞管型、顆粒樣變性及中性粒細(xì)胞浸潤。HBO治療組于1h和3h時(shí)，鏡下觀察

5、與腎移植組無顯著區(qū)別，在5h時(shí)其腎組織損傷則較腎移植組明顯減輕。
　　3.免疫組化法檢測腎組織ICAM-1、VCAM-1、C3、ED1以及IL-17的表達(dá)變化：（1）ICAM-1：ICAM-1蛋白主要表達(dá)于腎小管上皮細(xì)胞胞核及間質(zhì)細(xì)胞胞核。相對定量結(jié)果顯示，再灌注1h、3h、5h時(shí)腎移植組的ICAM-1蛋白表達(dá)量顯著高于假手術(shù)組和HBO治療組（P<0.05），而HBO治療組與假手術(shù)組無顯著差異（P>0.05）。腎移植組和HBO治療

6、組內(nèi)，隨時(shí)間延長ICAM-1蛋白表達(dá)量顯著升高（P<0.05）。
　　（2）VCAM-1：VCAM-1蛋白主要表達(dá)于腎小管上皮細(xì)胞胞漿，少量表達(dá)于腎小球細(xì)胞胞漿。相對定量結(jié)果顯示，再灌注1h、3h、5h時(shí)，腎移植組的VCAM-1蛋白表達(dá)量顯著高于假手術(shù)組（ P<0.05）， HBO治療后 VCAM-1蛋白表達(dá)量顯著降低（P<0.05），但仍高于假手術(shù)組。腎移植組和 HBO治療組內(nèi)，隨時(shí)間延長 VCAM-1蛋白表達(dá)量顯著升高（P<0

7、.05）。
　　（3）C3：C3蛋白主要表達(dá)于腎小管上皮細(xì)胞胞漿。相對定量結(jié)果顯示，再灌注1h、3h、5h時(shí)，腎移植組的C3蛋白表達(dá)量顯著高于假手術(shù)組（P<0.05），HBO治療后C3蛋白表達(dá)量顯著降低（P<0.05），但仍高于假手術(shù)組。腎移植組和HBO治療組內(nèi)，隨時(shí)間延長C3蛋白表達(dá)量顯著升高（P<0.05）。
　　（4）ED1(單核巨噬細(xì)胞表面標(biāo)志物)：ED1蛋白主要表達(dá)于腎小管上皮細(xì)胞胞漿。相對定量結(jié)果顯示，再灌注1h

8、時(shí)，腎移植組的ED1蛋白表達(dá)量顯著高于假手術(shù)組和HBO治療組（P<0.05），HBO治療組與假手術(shù)組無顯著差異；再灌注3h和5h時(shí)，腎移植組的ED1蛋白表達(dá)量顯著高于假手術(shù)組（P<0.05），HBO治療后ED1蛋白表達(dá)量顯著降低（P<0.05），但仍高于假手術(shù)組。腎移植組和HBO治療組內(nèi)，隨時(shí)間延長ED1蛋白表達(dá)量顯著升高（P<0.05）。
　　（5）IL-17（Th17細(xì)胞標(biāo)志物）：在腎移植組和HBO治療組，IL-17蛋白主要表

9、達(dá)于腎小管上皮細(xì)胞胞漿，腎小球細(xì)胞胞漿可見極少量表達(dá)，在假手術(shù)組，IL-17蛋白僅表達(dá)于腎小管上皮細(xì)胞胞漿，腎小球則無表達(dá)。相對定量結(jié)果顯示，再灌注1h、3h、5h時(shí)，腎移植組的IL-17蛋白表達(dá)量顯著高于假手術(shù)組（P<0.05），HBO治療后IL-17蛋白表達(dá)量顯著降低（P<0.05），但仍高于假手術(shù)組。腎移植組和HBO治療組內(nèi)，隨時(shí)間延長IL-17蛋白表達(dá)量顯著升高（P<0.05）。
　　4. real-time PCR檢測腎

10、組織ICAM-1和C3 mRNAs的表達(dá)變化：
　?。?）ICAM-1 mRNA：相對表達(dá)量結(jié)果顯示，再灌注1h時(shí)，三組間ICAM-1 mRNA的表達(dá)量無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；再灌注3h時(shí)，腎移植組ICAM-1 mRNA的表達(dá)量顯著高于假手術(shù)組和HBO治療組（P<0.05），HBO治療組與假手術(shù)組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；再灌注5h時(shí)，腎移植組ICAM-1 mRNA的表達(dá)量顯著高于假手術(shù)組（P<0.05），HBO治療后ICAM-1 mRNA的表達(dá)量顯著

11、降低（P<0.05），但仍高于假手術(shù)組。腎移植組和HBO治療組內(nèi)，再灌注1h和3h ICAM-1 mRNA的表達(dá)量無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05），再灌注5h ICAM-1 mRNA的表達(dá)量顯著高于1h和3h（P<0.05）。
　?。?）C3 mRNA：相對表達(dá)量結(jié)果顯示，再灌注1h、3h、5h時(shí)，腎移植組C3 mRNA的表達(dá)量顯著高于假手術(shù)組（P<0.05），HBO治療后 C3 mRNA的表達(dá)量顯著降低（P<0.05），但仍高于假手

12、術(shù)組。腎移植組和HBO治療組內(nèi)，隨時(shí)間延長C3 mRNA的表達(dá)量顯著升高（P<0.05）。
　　5.相關(guān)分析顯示，大鼠 SCr值與腎組織 ICAM-1、VCAM-1、C3、ED1、IL-17蛋白表達(dá)量的P值均小于0.05，均存在正相關(guān)關(guān)系。
　　結(jié)論：
　?。?）腎移植再灌注后早期即出現(xiàn)了腎功能的損害和腎組織破壞，粘附分子、C3、Th17細(xì)胞和單核巨噬細(xì)胞參與并促進(jìn)了腎缺血再灌注損傷，且隨著再灌注時(shí)間延長組織損傷逐漸加