高壓氧對(duì)小鼠缺血再灌注腎組織自噬的影響及其腎保護(hù)機(jī)制的研究.pdf

1、目的：
　　通過(guò)建立小鼠腎缺血再灌注損傷(ischemia reperfusion injury，IRI)模型，觀察自噬誘導(dǎo)和非誘導(dǎo)狀態(tài)下腎IRI中腎組織病理學(xué)、超微結(jié)構(gòu)、腎功能、自噬基因及自噬相關(guān)蛋白表達(dá)量的變化，以及高壓氧(hyperbaric oxygenation，HBO)治療對(duì)其表達(dá)的影響。探討腎IRI中自噬的發(fā)生發(fā)展、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及其對(duì)腎功能等的影響，進(jìn)一步闡明自噬在腎IRI中的作用以及HBO治療對(duì)自噬的影響。
　　

2、方法：
　　將C57BL/6小鼠隨機(jī)分為非自噬誘導(dǎo)組（非雷帕霉素處理）和自噬誘導(dǎo)組（雷帕霉素預(yù)處理）兩個(gè)大組。每組又分為正常對(duì)照組、假手術(shù)組、腎缺血組、HBO+腎缺血組、腎IRI組、腎IRI+HBO組,然后再將假手術(shù)組、腎IRI組及腎IRI+HBO組分為1h、3h、6h、12h、24h組，每組6只小鼠。其中，自噬誘導(dǎo)組所有小鼠均于腎缺血和腎IRI模型建立前1h行雷帕霉素預(yù)處理。正常對(duì)照組僅切開(kāi)腹腔后立即切取雙腎及采血。假手術(shù)組切開(kāi)

3、腹腔，雙側(cè)腎蒂不阻斷，分別在1h、3h、6h、12h、24h時(shí)切取雙腎并采取靜脈血。腎缺血組為切開(kāi)腹腔后，雙側(cè)腎蒂阻斷45min，后切取雙腎并采取靜脈血。HBO+腎缺血組為小鼠經(jīng)HBO預(yù)處理1h后切開(kāi)腹腔，雙側(cè)腎蒂阻斷45min，切取雙腎并采靜脈血。腎IRI組為切開(kāi)腹腔，雙側(cè)腎蒂阻斷45min后開(kāi)放血流，分別于再灌注后1h、3h、6h、12h、24h切取雙腎并采取靜脈血。腎IRI+HBO組為切開(kāi)腹腔，雙側(cè)腎蒂阻斷45min后開(kāi)放血流，分

4、別于再灌注后0h、2h、5h、11h、23h時(shí)行HBO治療，HBO治療1h后切取雙腎并采取靜脈血。采用HE染色觀察腎組織的病理改變，透射電鏡觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)及檢測(cè)自噬體，免疫組化法檢測(cè)Beclin-1、LC3-II、Atg-4、PKC及PI3K-III蛋白的表達(dá)，Western blot檢測(cè)LC3-II蛋白的表達(dá)以及全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清肌酐(SCr)。
　　結(jié)果：
　　1.腎功能變化
　?。?）在非雷帕霉素和雷帕霉

5、素組均可見(jiàn)假手術(shù)組SCr值與正常對(duì)照組無(wú)顯著差異；腎缺血組SCr值顯著高于正常對(duì)照組和假手術(shù)組（P<0.01）；HBO+腎缺血組SCr值顯著低于腎缺血組（P<0.05），但顯著高于正常對(duì)照組和假手術(shù)組（P<0.01）；腎IRI組SCr值各時(shí)間點(diǎn)顯著高于腎缺血組、正常對(duì)照組和假手術(shù)組（P<0.01）；腎IRI+HBO組SCr值各時(shí)間點(diǎn)顯著高于正常對(duì)照組和假手術(shù)組（P<0.01），腎IRI+HBO組SCr值于1h、3h、6h顯著低于腎IRI

6、組（P<0.01）；腎IRI組內(nèi)和腎IRI+HBO組內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)SCr值有顯著差異（P<0.05），且隨著時(shí)間延長(zhǎng)，SCr值逐漸增加，于24h達(dá)最高。
　?。?）在非雷帕霉素和雷帕霉素組組之間：非雷帕霉素腎IRI組和腎IRI+HBO組于1h、3h、6h、12h時(shí)SCr值顯著低于雷帕霉素組（P<0.05），其余雷帕霉素組的各組SCr值與非雷帕霉素組無(wú)顯著差異。
　　2.腎組織病理變化
　　非雷帕霉素和雷帕霉素組均可見(jiàn)正常對(duì)

7、照組和假手術(shù)組各時(shí)間點(diǎn)腎組織結(jié)構(gòu)正常。腎缺血組見(jiàn)腎小管間質(zhì)輕度出血，腎小球毛細(xì)血管攀輕度淤血，腎小管輕度腫脹。自噬誘導(dǎo)后，腎小管間質(zhì)出血及腎小球毛細(xì)血管攀淤血明顯，可見(jiàn)少量腎小管上皮細(xì)胞壞死脫落碎片。經(jīng)HBO預(yù)處理后腎小球及腎小管間質(zhì)未見(jiàn)明顯出血，余與腎缺血組鏡下觀察無(wú)顯著差別。腎IRI組1h、3h可見(jiàn)腎小管腫脹，部分腎小管管腔消失，腎小管管腔內(nèi)可見(jiàn)少量上皮細(xì)胞壞死脫落碎片，胞漿顆粒樣變性，腎小管間質(zhì)出血，隨著時(shí)間延長(zhǎng)病變逐漸加重，12

8、h時(shí)可見(jiàn)部分腎小管上皮細(xì)胞壞死脫落，24h時(shí)可見(jiàn)大片狀腎小管上皮細(xì)胞壞死脫落，同時(shí)可見(jiàn)大量的紅細(xì)胞管型，皮髓交界處最明顯。自噬誘導(dǎo)后，可見(jiàn)大片腎小管上皮細(xì)胞壞死脫落，蛋白管型增多。經(jīng)HBO治療后腎小管細(xì)胞腫脹和間質(zhì)出血以1h最明顯，3h、6h病變較腎IRI組減輕，出血隨著時(shí)間延長(zhǎng)逐漸減輕，12h、24h時(shí)腎小管上皮細(xì)胞壞死和腎小球毛細(xì)血管攀淤血較腎IRI同時(shí)間點(diǎn)減輕，但腎小管間質(zhì)出血較腎IRI對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)重，出血以髓質(zhì)明顯，腎小球囊腔可見(jiàn)

9、纖維素樣物質(zhì)滲出，紅細(xì)胞管型較少。
　　3.透射電鏡觀察自噬體的變化
　　在非雷帕霉素和雷帕霉素組均可見(jiàn)正常對(duì)照組和假手術(shù)組各時(shí)間點(diǎn)腎組織結(jié)構(gòu)正常，其間偶可見(jiàn)少量自噬體形成。腎缺血性損傷后可見(jiàn)部分線粒體稍腫脹，膜結(jié)構(gòu)不清晰，自噬體數(shù)量較正常對(duì)照組和假手術(shù)組增多，余鏡下觀察與正常對(duì)照組和假手術(shù)組無(wú)顯著差別。自噬誘導(dǎo)后，病變鏡下觀察無(wú)差別，自噬體數(shù)量增多，經(jīng)HBO預(yù)處理后，自噬體數(shù)量進(jìn)一步增加。腎IRI組可見(jiàn)大量的自噬泡和自噬體

10、形成，雙層膜結(jié)構(gòu)的自噬體明顯，自噬體包裹的線粒體及蛋白質(zhì)清晰可見(jiàn)，可見(jiàn)脂肪變性的脂滴形成，6h組可見(jiàn)自噬體最多，腎小管上皮細(xì)胞微絨毛失去膜型結(jié)構(gòu)，但輪廓尚可辨，線粒體稍腫脹，溶酶體少見(jiàn)。12h和24h時(shí)自噬體逐漸減少，腎小管上皮細(xì)胞游離面微絨毛逐漸消失，線粒體腫脹，部分嵴斷裂，可見(jiàn)少量次級(jí)溶酶體，腎小管基底膜不清晰，核膜出現(xiàn)皺褶且不清晰，病變以24h最顯著。自噬誘導(dǎo)后，對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)自噬體數(shù)量增加，病變加重。經(jīng)HBO治療后自噬體數(shù)量進(jìn)一步增

11、加，12h和24h時(shí)自噬體仍較多，但病變減輕，病變?nèi)砸?4h顯著。
　　4.免疫組化法檢測(cè)腎組織Beclin-1、LC3-II、PI3K-III、PKC以及Atg-4的表達(dá)變化：
　?。?）Beclin-1：主要表達(dá)于腎小管上皮細(xì)胞胞漿，少量表達(dá)于腎小球。相對(duì)定量結(jié)果顯示：
　?、僭诜抢着撩顾睾屠着撩顾亟M均可見(jiàn)正常對(duì)照組、假手術(shù)組及腎缺血組之間Beclin-1蛋白表達(dá)量無(wú)顯著差異，HBO+腎缺血組Beclin-1蛋白表

12、達(dá)量顯著低于正常對(duì)照組、假手術(shù)組及腎缺血組（P<0.01）。在非雷帕霉素腎IRI組于6h、12h時(shí)Beclin-1蛋白表達(dá)量顯著高于正常對(duì)照組、假手術(shù)組及腎缺血組，而在雷帕霉素腎IRI組于1h、3h、6h時(shí)Beclin-1蛋白表達(dá)量高于正常對(duì)照組、假手術(shù)組及腎缺血組（P<0.01）。在非雷帕霉素腎IRI+HBO組于1h、3h時(shí)Beclin-1蛋白表達(dá)量顯著高于正常對(duì)照組、假手術(shù)組及腎IRI組（P<0.01），于12h、24h時(shí)Becli

13、n-1蛋白表達(dá)量顯著低于腎IRI組（P<0.01）。雷帕霉素腎IRI+HBO組于1h、24h時(shí)Beclin-1蛋白表達(dá)量顯著低于正常對(duì)照組、假手術(shù)組，6h時(shí)顯著高于正常對(duì)照組、假手術(shù)組（P<0.01），腎IRI+HBO組于1h、3h、6h時(shí)Beclin-1蛋白表達(dá)量顯著低于腎IRI組（P<0.01）。在非雷帕霉素和雷帕霉素假手術(shù)組內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)Beclin-1蛋白表達(dá)量無(wú)顯著差異，腎IRI組內(nèi)和腎IRI+HBO組組內(nèi)3h、6h、12h、24

14、h時(shí)Beclin-1蛋白表達(dá)量均有顯著差異（P<0.01），且隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，Beclin-1蛋白表達(dá)量逐漸升高，于6h達(dá)最高，后隨著時(shí)間延長(zhǎng)逐漸降低。
　　②在非雷帕霉素和雷帕霉素之間：雷帕霉素正常對(duì)照組、假手術(shù)組Beclin-1蛋白表達(dá)量與非雷帕霉素組無(wú)顯著差異，雷帕霉素腎缺血組和HBO+腎缺血組Beclin-1蛋白表達(dá)量顯著高于非雷帕霉素組（P<0.01），雷帕霉素腎IRI組、腎IRI+HBO組均于1h、3h、6hBecli

15、n-1蛋白表達(dá)量顯著高于非雷帕霉素組（P<0.01），12h、24hBeclin-1蛋白表達(dá)量顯著低于非雷帕霉素組（P<0.01）。
　?。?）LC3-II：主要表達(dá)于腎小管上皮細(xì)胞胞漿，少量表達(dá)于腎小球。相對(duì)定量結(jié)果顯示：
　?、僭诜抢着撩顾睾屠着撩顾亟M均可見(jiàn)假手術(shù)組LC3-II蛋白表達(dá)量與正常對(duì)照組無(wú)顯著差異。在非雷帕霉素正常對(duì)照組、假手術(shù)組及腎缺血組之間LC3-II蛋白表達(dá)量無(wú)顯著差異，在雷帕霉素腎缺血組LC3-II蛋

16、白表達(dá)量顯著高于正常對(duì)照組、假手術(shù)組（P<0.01）。在在非雷帕霉素和雷帕霉素HBO+腎缺血組LC3-II蛋白表達(dá)量均顯著高于正常對(duì)照組、假手術(shù)組及腎缺血組（P<0.01）；腎IRI組LC3-II蛋白表達(dá)量顯著高于正常對(duì)照組、假手術(shù)組及腎缺血組（P<0.01），腎IRI+HBO組LC3-II蛋白表達(dá)量顯著高于正常對(duì)照組、假手術(shù)組及腎IRI組（P<0.01）；假手術(shù)組內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)LC3-II蛋白表達(dá)量無(wú)顯著差異；腎IRI組內(nèi)和腎IRI+HB

17、O組內(nèi)隨著時(shí)間延長(zhǎng)LC3-II蛋白表達(dá)量逐漸降低，于3h達(dá)最低，后隨著時(shí)間延長(zhǎng)逐漸增加，于24h達(dá)最高（P<0.01）。
　?、谠诜抢着撩顾睾屠着撩顾刂g：雷帕霉素各組及對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)組LC3-II蛋白表達(dá)量均顯著高于非雷帕霉素組（P<0.01）。
　　（3）PI3K-III：主要表達(dá)于腎小管上皮細(xì)胞胞漿。相對(duì)定量結(jié)果顯示：
　　①在非雷帕霉素和雷帕霉素組均可見(jiàn)假手術(shù)組PI3K-III蛋白表達(dá)量與正常對(duì)照組無(wú)顯著差異；腎缺

18、血組PI3K-III蛋白表達(dá)量顯著高于正常對(duì)照組、假手術(shù)組（P<0.01）。在非雷帕霉素HBO+腎缺血組PI3K-III蛋白表達(dá)量與正常對(duì)照組、假手術(shù)組無(wú)顯著差異。在雷帕霉素HBO+腎缺血組PI3K-III蛋白表達(dá)量顯著高于正常對(duì)照組、假手術(shù)組（P<0.01）。在非雷帕霉素HBO+腎缺血組PI3K-III蛋白表達(dá)量顯著低于腎缺血組（P<0.01）。在雷帕霉素HBO+腎缺血組PI3K-III蛋白表達(dá)量與腎缺血組無(wú)顯著差異。在在非雷帕霉素和

19、雷帕霉素腎IRI組于6h、12h時(shí)PI3K-III蛋白表達(dá)量顯著高于正常對(duì)照組和假手術(shù)組（P<0.01），而非雷帕霉素腎IRI組于1h、24h顯著低于腎缺血組（P<0.01），于6h時(shí)PI3K-III蛋白表達(dá)量顯著高于腎缺血組（P<0.01）。雷帕霉素腎IRI組于1h、3h、6h時(shí)PI3K-III蛋白表達(dá)量顯著低于腎缺血組，于12h、24h時(shí)PI3K-III蛋白表達(dá)量顯著高于腎缺血組（P<0.01）。非雷帕霉素腎IRI+HBO組于3h、

20、6h、12h時(shí)PI3K-III蛋白表達(dá)量顯著高于正常對(duì)照組和假手術(shù)組（P<0.01）， IRI+HBO組PI3K-III蛋白表達(dá)量與腎IRI組無(wú)顯著差異。雷帕霉素腎IRI+HBO組PI3K-III蛋白表達(dá)量顯著高于正常對(duì)照組、假手術(shù)組及腎IRI組（P<0.01）。在非雷帕霉素和雷帕霉素組假手術(shù)組內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)PI3K-III蛋白表達(dá)量無(wú)顯著差異，腎IRI組內(nèi)和腎IRI+HBO組內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)PI3K-III蛋白表達(dá)量有顯著差異（P<0.01）。

21、
　　②在非雷帕霉素和雷帕霉素組之間：雷帕霉素正常對(duì)照組、假手術(shù)組及腎缺血組PI3K-III蛋白表達(dá)量顯著低于非雷帕霉素組（P<0.01），雷帕霉素HBO+腎缺血組PI3K-III蛋白表達(dá)量顯著高于非雷帕霉素組（P<0.01），雷帕霉素腎IRI組PI3K-III蛋白表達(dá)量于1h、12h、24h顯著高于非雷帕霉素組（P<0.01），于3h、6h顯著低于非雷帕霉素組（P<0.05），雷帕霉素腎IRI+HBO組于1h、3h、12h、24

22、h時(shí)PI3K-III蛋白表顯著高于非雷帕霉素組（P<0.05），雷帕霉素腎IRI+HBO組于6hPI3K-III蛋白表顯著低于非雷帕霉素組（P<0.05）。
　?。?）PKC：主要表達(dá)于主要表達(dá)于腎小球和腎小管間質(zhì)。相對(duì)定量結(jié)果顯示：
　?、僭诜抢着撩顾豀BO+腎缺血組、腎缺血組、假手術(shù)組及正常對(duì)照組之間PKC蛋白表達(dá)量無(wú)顯著差異。在雷帕霉素假手術(shù)組PKC蛋白表達(dá)量與正常對(duì)照組無(wú)顯著差異；腎缺血組PKC蛋白表達(dá)量顯著高于正常

23、對(duì)照組和假手術(shù)組（P<0.01）；HBO+腎缺血組PKC蛋白表達(dá)量與正常對(duì)照組和假手術(shù)組無(wú)顯著差異，HBO+腎缺血組PKC蛋白表達(dá)量顯著低于腎缺血組（P<0.01）。在在非雷帕霉素和雷帕霉素腎IRI組于3h、6h、12h時(shí)PKC蛋白表達(dá)量顯均著高于正常對(duì)照組、假手術(shù)組及腎缺血組（P<0.01），24h時(shí)PKC蛋白表達(dá)量顯著低于正常對(duì)照組、假手術(shù)組及腎缺血組（P<0.01）；腎IRI+HBO組于3h、6h、12h時(shí)PKC蛋白表達(dá)量顯著高于

24、正常對(duì)照組、假手術(shù)組（P<0.01）；腎IRI+HBO組于3h、6h、12h時(shí)PKC蛋白表達(dá)量顯著低于腎IRI組（P<0.01），24h時(shí)PKC蛋白表達(dá)量顯著高于腎IRI組（P<0.01）；假手術(shù)組內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)PKC蛋白表達(dá)量無(wú)顯著差異；腎IRI組和腎IRI+HBO組組內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)PKC蛋白表達(dá)量有顯著差異（P<0.01），且隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，PKC蛋白表達(dá)量逐漸增加，于6h達(dá)最高，后隨著時(shí)間延長(zhǎng)，逐漸降低，于24h達(dá)最低。
　?、谠诜?/p>

25、雷帕霉素和雷帕霉素組之間：雷帕霉素正常對(duì)照組、假手術(shù)組及HBO+腎缺血組PKC蛋白表達(dá)量與非雷帕霉素組無(wú)顯著差異，雷帕霉素腎缺血組和腎IRI組于1h、3h、6h、12h時(shí)PKC蛋白表達(dá)量顯著高于非雷帕霉素組（P<0.05），雷帕霉素腎IRI+HBO組于3h時(shí)PKC蛋白表達(dá)量顯著低于非雷帕霉素組（P<0.01），雷帕霉素腎IRI+HBO組于24h時(shí)PKC蛋白表達(dá)量顯著高于非雷帕霉素組（P<0.01）。
　?。?）Atg-4：主要表達(dá)

26、于主要表達(dá)于腎小管上皮細(xì)胞胞漿。相對(duì)定量結(jié)果顯示：
　?、僭诜抢着撩顾丶偈中g(shù)組Atg-4蛋白表達(dá)量與正常對(duì)照組無(wú)顯著差異；腎缺血組和HBO+腎缺血組Atg-4蛋白表達(dá)量顯著高于正常對(duì)照組、假手術(shù)組（P<0.01），HBO+腎缺血組Atg-4蛋白表達(dá)量顯著低于腎缺血組（P<0.01）。在雷帕霉素正常對(duì)照組、假手術(shù)組及HBO+腎缺血組之間的Atg-4蛋白表達(dá)量與無(wú)顯著差異；腎缺血組Atg-4蛋白表達(dá)量顯著低于正常對(duì)照組、假手術(shù)組（P<

27、0.01）；HBO+腎缺血組Atg-4蛋白表達(dá)量顯著高于腎缺血組（P<0.01）。非雷帕霉素腎IRI組Atg-4蛋白表達(dá)量顯著高于正常對(duì)照組、假手術(shù)組（P<0.01），腎IRI組Atg-4蛋白表達(dá)量顯著低于腎缺血組（P<0.01）。雷帕霉素腎IRI組于1h、3h時(shí)Atg-4蛋白表達(dá)量顯著高于正常對(duì)照組、假手術(shù)組（P<0.01），6h、24h時(shí)Atg-4蛋白表達(dá)量顯著低于正常對(duì)照組、假手術(shù)組（P<0.01）。非雷帕霉素腎IRI+HBO組A

28、tg-4蛋白表達(dá)量顯著高于正常對(duì)照組、假手術(shù)組（P<0.01），腎IRI+HBO組于1h、6h、12h時(shí)Atg-4蛋白表達(dá)量顯著高于腎IRI組（P<0.01），腎IRI+HBO組于3h、24h時(shí)Atg-4蛋白表達(dá)量顯著低于腎IRI組（P<0.01）。雷帕霉素腎IRI+HBO組于1h、3h、6h時(shí)Atg-4蛋白表達(dá)量顯著低于正常對(duì)照組、假手術(shù)組（P<0.01），24h時(shí)Atg-4蛋白表達(dá)量顯著高于正常對(duì)照組、假手術(shù)組（P<0.01）。在非

29、雷帕霉素和雷帕霉素假手術(shù)組內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)Atg-4蛋白表達(dá)量無(wú)差異。非雷帕霉素腎IRI組內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)Atg-4蛋白表達(dá)量有顯著差異（P<0.01），隨著時(shí)間延長(zhǎng)Atg-4蛋白表達(dá)量逐漸增高，于3h達(dá)最高，后隨著時(shí)間延長(zhǎng)逐漸降低。雷帕霉素腎IRI組內(nèi)1h時(shí)Atg-4蛋白表達(dá)量顯著高于3h、6h、12h、24h（P<0.01），隨著時(shí)間延長(zhǎng)逐漸降低，與6h達(dá)最低，12h、24h時(shí)Atg-4蛋白表達(dá)量顯著高于6h。在非雷帕霉素和雷帕霉素腎IRI+H

30、BO組內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)Atg-4蛋白表達(dá)量有顯著差異（P<0.01），呈逐漸降低的趨勢(shì)，于24h達(dá)最低。
　?、冢涸诜抢着撩顾睾屠着撩顾亟M之間：雷帕霉素正常對(duì)照組和假手術(shù)組各時(shí)間點(diǎn)Atg-4蛋白表達(dá)量均顯著高于非雷帕霉素組（P<0.01），雷帕霉素各組Atg-4蛋白表達(dá)量均顯著低于非雷帕霉素組（P<0.01）。
　　5.Western blot檢測(cè)腎組織LC3-II蛋白的表達(dá)變化
　　（1）在非雷帕霉素和雷帕霉素組均可見(jiàn)假手

31、術(shù)組LC3-II蛋白表達(dá)量與正常對(duì)照組無(wú)顯著差異。非雷帕霉素腎缺血組和HBO+腎缺血組LC3-II蛋白表達(dá)量顯著高于正常對(duì)照組和假手術(shù)組（P<0.05），HBO+腎缺血組LC3-II蛋白表達(dá)量顯著高于腎缺血組（P<0.05）。雷帕霉素腎缺血組和HBO+腎缺血組LC3-II蛋白表達(dá)量顯著低于正常對(duì)照組和假手術(shù)組（P<0.01），HBO+腎缺血組LC3-II蛋白表達(dá)量與腎缺血組無(wú)顯著差異。非雷帕霉素腎IRI組LC3-II蛋白表達(dá)量顯著高于正

32、常對(duì)照組和假手術(shù)組（P<0.01），腎IRI于3h時(shí)LC3-II蛋白表達(dá)量顯著低于腎缺血組（P<0.01）。雷帕霉素腎IRI組LC3-II蛋白表達(dá)量顯著低于正常對(duì)照組、假手術(shù)組及腎缺血組（P<0.05）。在非雷帕霉素和雷帕霉素腎IRI+HBO組各時(shí)間點(diǎn)LC3-II蛋白表達(dá)量顯著高于正常對(duì)照組、假手術(shù)組及腎IRI組（P<0.05）；假手術(shù)組內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)LC3-II蛋白表達(dá)量無(wú)顯著差異；腎IRI組內(nèi)和腎IRI+HBO組內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)LC3-II蛋

33、白表達(dá)量有顯著差異（P<0.01），且隨著時(shí)間延長(zhǎng)，LC3-II蛋白表達(dá)量逐漸增高，于24h達(dá)最高。
　?。?）在非雷帕霉素和雷帕霉素組之間：雷帕霉素各組LC3-II蛋白表達(dá)量均顯著高于非雷帕霉素組（P<0.05）。
　　6. SCr和LC3-II的相關(guān)性分析
　　相關(guān)分析顯示，小鼠SCr值與腎組織LC3-II蛋白表達(dá)量的相關(guān)系數(shù)，在非雷帕霉素組為r=0.7156，在雷帕霉素組為r=0.6719，P值均小于0.01，均

34、存在正相關(guān)關(guān)系。
　　結(jié)論：
　　1.HBO預(yù)處理對(duì)腎缺血損傷起保護(hù)作用。
　　2.早期HBO治療能夠減輕腎IRI，隨著時(shí)間延長(zhǎng)，HBO的保護(hù)效應(yīng)減弱。
　　3.自噬的激活加重了腎IRI，HBO治療在保護(hù)腎IRI的同時(shí)也激活了自噬，HBO治療在腎IRI中發(fā)揮了雙重作用。
　　4.在腎IRI中，HBO治療主要通過(guò)和Beclin1-Atg14-Vps34-Vps15信號(hào)通路激活自噬。
　　5.在腎IRI中