PSA-NCAM調控細胞增殖機理的研究.pdf

1、神經細胞粘附分子(NCAM)是一種屬于免疫球蛋白超家族的糖蛋白。在脊椎動物中，多聚唾液酸（Polysialic Acid，PSA）是唾液酸以α-2,8連接聚合成的鏈狀聚合物修飾在NCAM上。PSA是一種高度親水的聚合物，除了可通過空間位置影響細胞胞外基質蛋白之間的粘附外，并可調控同源或異源、自體或其它蛋白間的相互作用介導的胞內信號通路。PSA對NCAM糖基化的動態(tài)調整，對NCAM介導發(fā)育過程中腦回路的正確形成，突觸可塑性，學習和記憶有重

2、要的影響。
　　本文利用在噬菌體中提取的解聚酶內源性乙酰-神經氨酸苷酶（Endo-N-Acetylneuraminidase，EndoN）來降解神經細胞表面的NCAM的多聚唾液酸;研究去除多聚唾液酸后，NCAM介導的胞內信號通路對細胞的生長可能帶來的影響。所用的細胞株為PSA-NCAM陽性的鼠嗜鉻細胞瘤PC12細胞和人神經母細胞瘤SH-SY5Y細胞，及PSA陰性的大鼠膠質細胞瘤C6細胞(PSA-,NCAM+)和小鼠L929成纖維細

3、胞(PSA-,NCAM-)。實驗結果顯示加入EndoN至PSA陽性細胞(PC12,SH-SY5Y)孵育后可成功去除細胞表面的NCAM上的PSA，PSA去除后細胞的增殖受到抑制，處于G1期的細胞數目明顯增多。而EndoN對PSA陰性細胞(C6,L929)及失活的EndoN對PSA陽性細胞，則沒上述影響。EndoN孵育對在G1過渡至S期過程中起關鍵作用的周期素依賴性激酶2(CDK2)蛋白表達量無影響，但是降低其酶活力。通過蛋白免疫印跡實驗和

4、免疫熒光細胞化學分析發(fā)現是由于周期蛋白依賴性激酶抑制因子p21Cip1/Waf1表達量增加，進而抑制CDK2酶活力，使細胞周期停滯在G1期。抑制MAPK信號通路中的ERK可完全消除EndoN所造成的細胞增殖抑制、p21Cip1/Waf1的蛋白表達上調、和CDK2酶活抑制，說明移除PSA后，NCAM通過ERK-MAPK通路調控細胞周期。加入成纖細胞生長因子受體（Fibroblast growth factor receptor，FGFR）