廣藿香和黃連主要活性成分抗炎癥性腸病的作用和機(jī)制探討.pdf

1、目的:
　　炎癥性腸?。↖nflammatory bowel disease，IBD）是一組累及胃腸道的慢性炎癥性疾病，其主要臨床表現(xiàn)為腹瀉、腹痛、粘液血便，嚴(yán)重影響了人們的生活質(zhì)量。在IBD發(fā)展過程中，腸上皮和黏膜免疫系統(tǒng)屏障作為機(jī)體的第一道防線，能積極抵抗細(xì)菌、病毒侵襲及食物抗原侵入，維持其完整性至關(guān)重要。而一旦黏膜屏障被損害，則會導(dǎo)致腸道內(nèi)促炎和抗炎因子的平衡失調(diào)，引起正?；蛞咽軗p的腸道組織產(chǎn)生過度的黏膜免疫反應(yīng)，從而反向加

2、劇腸道黏膜損傷，進(jìn)而誘導(dǎo)IBD的產(chǎn)生和發(fā)展。因此，從維持腸黏膜屏障完整和調(diào)節(jié)腸道炎癥因子平衡兩個(gè)角度，進(jìn)一步了解IBD的病機(jī)，對尋求治療IBD的有效藥物具有重要的指導(dǎo)意義。
　　傳統(tǒng)中草藥廣藿香和黃連，在腸炎的治療方面已有悠久的歷史?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，廣藿香主要揮發(fā)成分—廣藿香油、廣藿香酮和黃連的主要生物堿成分—小檗堿(Berberine，BBR)均具有抗IBD的活性。而廣藿香醇(Patchouli alcohol，PA)為廣藿香揮發(fā)

3、成分的指標(biāo)性成分，與此同時(shí)，巴馬亭(Palmatine，PMT)和小檗紅堿(Berberrubine，BB)為黃連中結(jié)構(gòu)類似于小檗堿的成分，且巴馬亭臨床上常用于腸炎的治療，小檗紅堿為小檗堿的體內(nèi)代謝產(chǎn)物之一。因此，推測PA、BB、PMT可能具有抗IBD作用，并且本文擬從修復(fù)“腸黏膜損傷”和緩解“炎癥損傷”兩個(gè)角度，評價(jià)其抗IBD的活性并探討其可能的作用機(jī)制，以幫助進(jìn)一步了解IBD的病機(jī)，同時(shí)深入對廣藿香及黃連的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的認(rèn)識。

4、>　　方法:
　　SPF級雄性Balb/C小鼠，除正常組(Control)之外，均自由飲用3％DSS水溶液建立實(shí)驗(yàn)性腸炎模型。造模同時(shí)，分別灌胃給予相應(yīng)藥物—廣藿香醇(PA，10、20、40mg/kg)、小檗紅堿(BB，10、20 mg/kg)、巴馬亭(PMT，50、100 mg/kg)、小檗堿(BBR，50 mg/kg)或柳氮磺胺吡啶(SASP，200 mg/kg)，每天一次，持續(xù)給藥7天。以小鼠疾病活動評分(DAI)，結(jié)腸損傷

5、程度（結(jié)腸長度變化，HE染色觀察組織病理學(xué)變化并進(jìn)行評分，Q-PCR檢測結(jié)腸粘蛋白mucin-1和mucin-2的含量表達(dá)差異），結(jié)腸炎癥指標(biāo)[生化試劑盒檢測髓過氧化物酶(MPO)活性變化和Elisa法測定結(jié)腸組織中炎癥因子IFN-γ、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-12、IL-17及IL-4、IL-10的水平差異]為檢測指標(biāo)，評價(jià)PA抗IBD的活性并考察其可能的作用機(jī)制。此外，免疫印跡法檢測腸組織中緊密連接蛋白（zo-1、zo

6、-2和occludin、claudin1）和經(jīng)典凋亡相關(guān)蛋白(Bax和Bcl-2)的表達(dá)差異以進(jìn)一步評價(jià)BB和PMT抗IBD活性及其可能的作用機(jī)制。
　　結(jié)果:
　　本文研究發(fā)現(xiàn)，在DSS誘導(dǎo)的IBD模型中，PA、BB、PMT等藥物均能顯著降低小鼠DAI評分，恢復(fù)結(jié)腸長度，修復(fù)結(jié)腸組織病理學(xué)變化，下調(diào)病理學(xué)評分(HistologicalScores)并減少髓過氧化物酶(MPO)和粘蛋白(mucin-1和mucin-2)的表達(dá)

7、。且PA(40 mg/kg)、BB(20 mg/kg)或PMT(100 mg/kg)能顯著抑制炎癥細(xì)胞因子(TNF-α、IFN-γ、IL-1β、IL-6、IL-4、IL-10)的表達(dá);此外，BB和PMT尚可調(diào)節(jié)DSS所誘導(dǎo)IBD小鼠結(jié)腸組織中緊密連接蛋白和凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)，具體表現(xiàn)為:BB(20 mg/kg)或PMT（100 mg/kg）能在顯著提升zo-1、zo-2、claudin-1、occludin、凋亡抑制蛋白Bcl-2的表達(dá)

8、水平的同時(shí)顯著凋亡蛋白(Bax)的表達(dá)。
　　結(jié)論:
　　PA、BB和PMT具有抗IBD活性，且其在保護(hù)腸組織免受DSS誘導(dǎo)的炎癥或損傷的過程中，可能的作用機(jī)制與維持腸屏障功能和抑制炎癥反應(yīng)密切相關(guān)。PA上調(diào)腸組織中粘蛋白，而BB和PMT則能進(jìn)一步上調(diào)緊密連接蛋白、抗凋亡蛋白的表達(dá)，下調(diào)凋亡蛋白的濃度，進(jìn)而保護(hù)結(jié)腸黏膜組織，修復(fù)腸組織的屏障功能;此外，三者均能抑制疾病發(fā)生期間病變部位的炎癥因子表達(dá)，減少炎癥細(xì)胞的浸潤，緩解腸