基于可變數(shù)目串聯(lián)重復(fù)序列的痰液結(jié)核分枝桿菌檢測(cè)方法建立及初步應(yīng)用.pdf

1、目的：傳統(tǒng)的核酸擴(kuò)增（NAA）技術(shù)檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌(MTB)，因其簡(jiǎn)單快捷、靈敏度高被臨床上大量使用，但該技術(shù)檢測(cè)結(jié)果假陽(yáng)性率高的缺陷，是其應(yīng)用于結(jié)核病臨床檢驗(yàn)診斷的重大挑戰(zhàn)。本研究首次利用結(jié)核分枝桿菌散在分布單元----數(shù)目可變串聯(lián)重復(fù)基因序列（mycobacterial interspersed repetitive unit–variable number of tandem repeat，MIRU-VNTR）的分布特點(diǎn)，采用PC

2、R技術(shù)直接對(duì)痰液樣本進(jìn)行基因擴(kuò)增，以檢測(cè)痰液標(biāo)本MTB并進(jìn)行相關(guān)質(zhì)量控制，通過(guò)特異度、靈敏度等指標(biāo)的臨床性能評(píng)價(jià)，為該方法在臨床的進(jìn)一步推廣應(yīng)用奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　方法：根據(jù)擴(kuò)增條件及臨床檢測(cè)實(shí)際需要，優(yōu)化選擇VNTR位點(diǎn)MTUB21， MTUB04，QUB-18， QUB-26， QUB-11b， MIRU31， MIRU10和MIRU26作為檢測(cè)靶標(biāo)，建立可直接用于臨床痰液標(biāo)本檢測(cè)的方法，收集130例肺MTB患者和200例非結(jié)

3、核患者（其它肺部疾?。┑呐R床痰液樣本，分別用MIRU-VNTR法和熒光定量 PCR（FQ-PCR）法對(duì)上述樣本進(jìn)行檢測(cè)，兩種檢測(cè)方法結(jié)果與羅氏培養(yǎng)法、臨床診斷進(jìn)行比較分析。
　　結(jié)果：以羅氏培養(yǎng)法為金標(biāo)準(zhǔn)時(shí)， MIRU-VNTR法的靈敏度為93.1％（108/116），特異度為97.7%（209/214），F(xiàn)Q-PCR法的靈敏度為94.0%（109/116），特異度為96.7%（207/214），MIRU-VNTR法和FQ-PCR

4、法檢測(cè)結(jié)果無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（χ2=0.352，P=0.569﹥0.05）。以臨床診斷為金標(biāo)準(zhǔn)時(shí)， MIRU-VNTR法的靈敏度為86.9%（113/130），特異度為100%（200/200）, FQ-PCR法的靈敏度為87.7%（114/130），特異度為99.0%（198/200），MIRU-VNTR法和FQ-PCR法檢測(cè)結(jié)果無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（χ2=0.030， P=0.862﹥0.05），但MIRU-VNTR法未發(fā)現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。在MIRU

5、-VNTR法檢測(cè)為陽(yáng)性的結(jié)果中，98.2%（111/113）的樣本分子編碼互不相同，只有1.8%（2/113）分子編碼一致（皆為5-4-6-8-5-5-3-8），對(duì)此2例編碼一致的樣本，經(jīng)過(guò)重復(fù)檢測(cè)，結(jié)果表明此2例病人的確攜帶MTB，并非由于交叉污染所致。
　　結(jié)論：與傳統(tǒng)FQ-PCR方法比較，MIRU-VNTR檢測(cè)方法靈敏度、特異度均無(wú)顯著差異，MIRU-VNTR法的優(yōu)勢(shì)在于，通過(guò)賦予每例樣本特定的指紋信息，使不同樣本的陽(yáng)性結(jié)果