牛分枝桿菌檢測方法的建立及應(yīng)用研究.pdf

1、目的：建立一種結(jié)核分枝桿菌的雙重PCR檢測方法；探討乳液在牛結(jié)核病檢測中的應(yīng)用價(jià)值；利用PCR方法和PhaB法以及細(xì)菌分離培養(yǎng)法，對模擬樣本和臨床樣本進(jìn)行檢測，探討各種方法的臨床應(yīng)用價(jià)值，為建立牛結(jié)核病快速診斷方法奠定基礎(chǔ)。
　　 方法：以牛分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株，建立一種PCR擴(kuò)增方法；研究PhaB法檢測模擬鼻拭子樣本中牛分枝桿菌的靈敏度；利用模擬乳樣建立乳樣的PCR和PhaB檢測方法；將PCR法、PhaB法和細(xì)菌分離培養(yǎng)法應(yīng)用于臨

2、床樣本的檢測。
　　 結(jié)果：建立了一種分枝桿菌的雙重PCR檢測方法，NTM菌株擴(kuò)增片段長度在361bp～383bp之間，MTC菌株擴(kuò)增出兩條目的帶，長度分別為368bp和225bp，靈敏度為大于等于10-6mg/mL的菌含量，檢測時(shí)間為5h。PhaB法檢測模擬鼻拭子樣本的靈敏度為牛分枝桿菌活菌含量為50～500條/mL，24h內(nèi)可判讀結(jié)果。模擬乳樣檢測可得陽性結(jié)果。對206份臨床樣本進(jìn)行檢測，結(jié)果PCR擴(kuò)增陽性3份，均為PPD陽

3、性樣本；PhaB法檢測結(jié)果全為陰性；從一份PCR和PPD同為陽性的樣本中分離到一株分枝桿菌，菌型鑒定結(jié)果為結(jié)核分枝桿菌，對該分離株進(jìn)行PhaB法和PCR法檢測結(jié)果均為陽性。
　　 結(jié)論：所建立的雙重PCR檢測方法，特異性好，為結(jié)核分枝桿菌的快速檢測提供了一可供選擇的手段；相比之下，PhaB法檢測所用時(shí)間較長，但可以直接檢測樣本中活菌的存在，結(jié)果更加可靠；乳液可用于牛結(jié)核病的診斷；應(yīng)用于臨床檢測，PCR和PhaB法的靈敏度還有待進(jìn)