葉子花內生細菌的多樣性分析及BS11的抑菌活性的研究.pdf

1、植物內生細菌是定殖在健康植物的各種組織和器官中，與植物之間形成互惠共存、相互制約的和諧聯(lián)合關系的一類微生物，是植物病害生物防治上一類極具應用潛能的資源菌。近幾年，人們探索了大蒜，甘草，紅樹等多種具有特殊藥用價值或特殊生態(tài)環(huán)境的植物的內生細菌的多樣性及防病抗病效果，葉子花作為一種有著優(yōu)良的耐高溫、抗旱和抗污染特性的園林觀賞植物，其內生細菌的研究卻鮮見報道?；谶@點，我們對本實驗進行了設計，通過分離葉子花內生細菌并其多樣性進行了分析；以楊樹

2、腐爛病菌為指示菌利用平板對峙的方法篩選出具有良好抑菌活性的內生菌株BS11，對BS11菌株進行了系統(tǒng)的分類學鑒定；對該拮抗菌的抗病、促生等活性進行了研究。具體結果如下：
　　 ⑴用傳統(tǒng)的分離培養(yǎng)的方法對葉子花植物不同組織進行多次內生細菌的分離，并對葉子花內生細菌的分離方法進行了優(yōu)化。葉子花內生細菌的分離采用改進后的分離方法，具體如下：①選材：選擇多年生較為健壯的艷紅葉子花為材料。②取材：在葉子花枝條的中間部位，用無菌刀切取莖段和

3、葉片，用鐵鏟挖10cm深切取葉子花的根段，摘取成熟的葉子花的葉，無菌條件下帶回實驗室。③表面消毒：將組織塊用無菌水表面沖洗，晾干，用十分之一天平分別稱取葉子花的根、莖、葉組織各1g，剪成小塊，然后依次在75％乙醇中浸泡30s、1％的升汞中浸泡2min，最后用無菌水漂洗3次。
　　 ⑵采用Shannon-Wiener多樣性指數(shù)（H）、豐度（D）、均勻度（J）和CFU4個指標對分離結果進行葉子花內生細菌的多樣性分析。結果顯示：不同月

4、份所測得的CFU值存在差異，6月份和9月份葉子花內生細菌的菌落數(shù)相對較多，到9月份達到最大值為1.3333，而3月份和12月份菌落個數(shù)相對較少，分別只有0.8和0.5333。從其他三個指標H、D、J來看，葉子花內生細菌的多樣性、豐度和均勻度在6月份和9月份同3月份和12月份相比均較高；葉子花根中的多樣性指數(shù)（H）的值、豐度指數(shù)（D）值和CFU值均高于其他兩個組織。
　　 ⑶以楊樹腐爛病菌為指示菌，用對峙培養(yǎng)的方法對分離到的11株

5、葉子花內生細菌進行篩選。結果發(fā)現(xiàn)：BS11菌株對楊樹腐爛病菌的抑制率達到了71％。用其他病原真菌以同樣的方法對BS11菌株的廣譜抑菌性進行了檢測，發(fā)現(xiàn)該菌株對合歡枯萎病菌、楊樹水泡潰瘍病菌、梔子花炭疽病菌、桑炭疽病菌、蘋果輪紋病菌等的生長也有很好的抑制效果。
　　 ⑷對BS11菌株進行了系統(tǒng)的分類學的鑒定。結果表明：將16SrDNA測序結果同其他序列一起，用MEGA4.0軟件的NJ法建樹，發(fā)現(xiàn)BS11和Burkholderia

6、anthina聚類在一起。BS11菌株在NA培養(yǎng)基上菌落呈淺黃色，表面光滑，中央突起，邊緣整齊；在PDA培養(yǎng)基上菌落呈白色，邊緣波狀，中央平整；革蘭氏染色陰性、桿狀、無芽孢；生理生化中氧化酶延遲反應。BS11的這些特征符合Burkholderia的特證。
　　 ⑸用不同濃度梯度的BS11菌株發(fā)酵液對葉子花進行促生性檢測。結果顯示:稀釋10×的菌液處理過的葉子花根長同清水對照的差異達到顯著水平；未經(jīng)稀釋的發(fā)酵液對葉子花生根有抑制作