日本弓背蟻共生放線菌的多樣性分析及抑菌活性研究.pdf

1、來(lái)源于微生物的活性物質(zhì)長(zhǎng)久以來(lái)作為前導(dǎo)化合物發(fā)揮顯著作用。然而，隨著半個(gè)多世紀(jì)以來(lái)人們對(duì)土壤和水體等一些趨同環(huán)境中環(huán)境微生物的大量篩選，導(dǎo)致我們獲得的化合物往往是已知的。因此，很多學(xué)者建議從新生境中獲得新菌種，發(fā)現(xiàn)新的活性物質(zhì)。目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)昆蟲(chóng)共生放線菌及其產(chǎn)生化合物的相關(guān)研究表明，生活在這些特殊環(huán)境中的微生物能夠合成多種新奇結(jié)構(gòu)化合物，為發(fā)現(xiàn)新的微生物藥物提供可能。本論文旨在從純培養(yǎng)角度對(duì)日本弓背蟻體內(nèi)及體表的放線菌進(jìn)行多樣性分析，

2、以及抑菌活性初步篩選，以期挖掘更多的微生物新種以及具有生物活性的放線菌資源，為活性菌株次級(jí)代謝產(chǎn)物的后續(xù)研究打好基礎(chǔ)。
　　本研究選用6種不同分離培養(yǎng)基對(duì)日本弓背蟻不同部位的共生放線菌進(jìn)行系統(tǒng)分離，分析不同培養(yǎng)基以及螞蟻不同部位的出菌率，對(duì)獲得放線菌進(jìn)行抑菌活性篩選，同時(shí)測(cè)定部分稀有菌株及部分活性較好的鏈霉菌的16S rRNA基因序列，并進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育分析，將菌株歸類到屬，分析螞蟻不同部位純培養(yǎng)放線菌的多樣性，取得的結(jié)果如下:

3、>　　(1)本文選用6種不同分離培養(yǎng)基，對(duì)日本弓背蟻不同部位（表皮、頭、胸和腹部）的共生放線菌進(jìn)行系統(tǒng)分離，共得到124株可培養(yǎng)放線菌，去重復(fù)后得到116株。
　　(2)分析螞蟻不同部位分離出的放線菌數(shù)量后發(fā)現(xiàn)，頭部的出菌率最高，占67.2％，其次為表皮，胸部和腹部分離出的放線菌所占比例較小。
　　(3)對(duì)分離到的放線菌進(jìn)行抑菌活性檢測(cè)，共篩選得到活性菌株19株。其中，有16株對(duì)5種以上病原真菌表現(xiàn)出抑制活性（較強(qiáng)或較弱）;

4、14株對(duì)5種以上病原真菌表現(xiàn)出較好的抑制活性（不包括弱活性）;10株對(duì)某種或某些病原真菌的抑菌率在50％以上。這些活性菌株主要分布在螞蟻頭部，其次分布在表皮部位。
　　(4)通過(guò)形態(tài)及部分菌株的16S rRNA基因分析后將這些菌株歸類到8個(gè)屬包括鏈霉菌屬（Streptomyces），原小單孢菌屬（Promicromonospora），小單孢菌屬（Micromonospora），野野村氏菌屬（Nonom uraea），疣孢菌屬（Ve

5、rrucosispora），棲植物菌屬（Phytohabitans），小雙孢菌屬（Microbispora）及諾卡氏菌屬（Nocardia）。其中，鏈霉菌屬為優(yōu)勢(shì)菌屬（占89.7％）。
　　(5)通過(guò)系統(tǒng)發(fā)育分析發(fā)現(xiàn)，鏈霉菌屬內(nèi)不同種間形成不同分支，表明了日本弓背蟻內(nèi)共生鏈霉菌多樣性較高。同時(shí)，隸屬于不同菌屬的稀有菌株之間也形成不同的分支，顯示出了日本弓背蟻共生放線菌具備多樣性。
　　(6)對(duì)菌株的16S rRNA基因序列進(jìn)

6、行分析后發(fā)現(xiàn)3個(gè)潛在新種，經(jīng)多相分類學(xué)鑒定確定菌株1H-HV4為諾卡氏菌屬的一個(gè)新種，命名為Nocardia camponoti;菌株1H-GS9為鏈霉菌屬的一個(gè)新種，命名為Streptomyces formicae;菌株1C-HV12為原小單孢菌屬的一個(gè)新種，命名為Promicromonospora alba。
　　從本文的內(nèi)容中可以看出日本弓背蟻共生放線菌具有豐富的多樣性，同時(shí)表現(xiàn)出很好的抑菌活性，在發(fā)現(xiàn)新型生物活性物質(zhì)方面具