C1QBP在腎癌發(fā)展進程中的作用.pdf

1、目的：
　　腎癌在泌尿系統(tǒng)腫瘤中很常見，在我國有很高的發(fā)病率，是一種嚴重威脅人類健康的疾病。而腫瘤的發(fā)展與腫瘤細胞的增殖、趨化、侵襲以及黏附能力均有重要關系。腎癌靶向治療尚有許多未知領域需要進一步探索。因此，目前亟需進一步探討腎癌的發(fā)展機制并探索新的生物靶點。以往的研究顯示 C1QBP在多種惡性腫瘤中的表達增多，同時也有報道顯示C1QBP在宮頸癌中低表達，說明C1QBP在腫瘤中的表達及對腫瘤生物學行為的調(diào)節(jié)有組織特異性，但目前有關

2、C1QBP在腎癌中的研究尚未見報道。因此，本研究將檢測C1QBP在腎癌中的表達情況，探討C1QBP在腎癌發(fā)展中對腎癌細胞增殖、趨化、侵襲以及黏附能力的影響，初步明確C1QBP在腎癌發(fā)展中的作用。
　　方法：
　　采用Western Blotting、Realtime PCR、免疫組化的方法比較C1QBP在腎癌及癌旁組織中的表達水平；統(tǒng)計學分析C1QBP表達與臨床病理參數(shù)之間的相關性。應用Realtime PCR的方法檢測C1

3、QBP在正常腎上皮細胞和腎癌細胞系中的表達水平。應用慢病毒載體介導的RNA干擾技術構建C1QBP穩(wěn)定降表達的人腎癌786-0細胞系，用Western Blotting和Realtime PCR的方法驗證C1QBP表達水平。通過CCK8實驗、趨化運動實驗、Matrigel侵襲實驗和細胞黏附實驗分別檢測C1QBP降表達對人腎癌786-0細胞系的增殖能力、EGF誘導的趨化運動能力、侵襲能力和EGF誘導的黏附能力的影響。通過基因芯片檢測，分析C

4、1QBP降表達對人腎癌786-0細胞系基因表達的影響，Realtime PCR驗證差異基因表達。通過Western Blotting檢測分析C1QBP調(diào)控腎癌黏附功能的分子機制。SCID小鼠體內(nèi)實驗研究C1QBP降表達對人腎癌786-0細胞系生長和轉移的影響，并通過免疫組化檢測C1QBP降表達對增殖相關抗原PCNA表達水平的影響。
　　結果：
　　1.腎癌組織中C1QBP的RNA及蛋白表達量低于癌旁組織，且C1QBP表達與患

5、者臨床組織學分期和術后生存率顯著相關。
　　2. C1QBP在腎癌細胞中的表達低于腎上皮細胞，且隨著腎癌細胞惡性程度的增加C1QBP表達逐漸降低。
　　3.應用慢病毒介導的RNA干擾技術成功建立C1QBP穩(wěn)定降表達的腎癌786-0細胞系，Western Blotting和Realtime PCR驗證C1QBP蛋白和基因表達均明顯下降。
　　4. C1QBP降表達的腎癌786-0細胞系與對照組相比增殖能力、EGF誘導的趨

6、化運動能力、細胞侵襲能力和EGF誘導的黏附能力均明顯增強。
　　5.通過基因芯片分析，C1QBP敲除會影響細胞黏附相關基因的表達，通過Realtime PCR進一步檢測了8個與黏附相關的基因，其中L1CAM在786-0-shC1QBP細胞中的表達顯著增加。
　　6. C1QBP敲除后腎癌細胞中β-catenin表達增高，GSK3蛋白磷酸化水平也增高。
　　7. C1QBP降表達促進種植瘤生長和轉移，并且種植瘤中PCNA

7、表達明顯高于對照組。
　　結論：
　　1.與癌旁組織相比，C1QBP在腎癌組織標本中表達較低，且與腫瘤病人的組織學分期和術后生存率相關，此外隨著腫瘤細胞惡性程度增高C1QBP表達水平降低。
　　2.通過降低C1QBP的表達，可以促進腎癌細胞的增殖、趨化、侵襲能力。
　　3. C1QBP降表達可以增強腎癌細胞的黏附能力，可能是通過激活Wnt通路相關蛋白，上調(diào)LICAM發(fā)揮生物學作用。
　　4. C1QBP降表