EphA2-EphrinA1在腎癌中的表達(dá)及其在轉(zhuǎn)移中的作用機(jī)制研究.pdf

1、腎癌是起源于腎小管上皮細(xì)胞的惡性腫瘤，占腎臟惡性腫瘤的80％～90％，成人惡性腫瘤的2％～3％。隨著生活水平的提高和醫(yī)學(xué)影像學(xué)的進(jìn)步，在早期診斷和早期手術(shù)方面均取得滿意效果。但對(duì)于術(shù)后復(fù)發(fā)和伴有轉(zhuǎn)移灶的晚期腎癌患者目前尚缺乏較好的治療方案，臨床上通常以臨床分期和病理分級(jí)作為判斷預(yù)后的依據(jù)，有一定的局限性。因此，尋找預(yù)測(cè)腎癌惡性程度的生物學(xué)標(biāo)記物，已成為腎癌研究的熱點(diǎn)，以便為腎癌的生物治療提供新靶點(diǎn)和新思路。
　　 促紅細(xì)胞生成素

2、產(chǎn)生肝細(xì)胞受體（Eph）家族是一類新發(fā)現(xiàn)的酪氨酸蛋白激酶受體（RTKs）。EphA2是其中最早被發(fā)現(xiàn)的一個(gè)成員，在正常上皮細(xì)胞中表達(dá)，廣泛高表達(dá)于不同的腫瘤組織（乳腺癌、結(jié)腸癌、食管癌、前列腺癌、惡性間皮癌等）和細(xì)胞系。EphA2在正常上皮細(xì)胞中位于細(xì)胞連接處，配體EphrinA1能以較高的親和力與EphA2結(jié)合，兩者結(jié)合后能導(dǎo)致受體和配體均發(fā)生酪氨酸磷酸化而產(chǎn)生雙向信號(hào)傳導(dǎo)，通過(guò)其下游信號(hào)調(diào)節(jié)細(xì)胞正常的生長(zhǎng)、發(fā)育，同時(shí)也促進(jìn)EphA2

3、受體自身的降解。在惡性腫瘤細(xì)胞中EphA2定位異常，由細(xì)胞連接處轉(zhuǎn)變?yōu)閺V泛分布于細(xì)胞表面，導(dǎo)致EphA2難以有效的與其配體接觸，因而其自身的降解減少，所以在許多侵襲性腫瘤中EphA2和EphrinA1通常是過(guò)表達(dá)的。有學(xué)者通過(guò)一種模擬配體EphrinA1-Fc干預(yù)腫瘤細(xì)胞株（PC-3、293、Cos-7），顯示EphA2受體活化、磷酸化程度增強(qiáng)，細(xì)胞形態(tài)學(xué)發(fā)生變化。因此，EphA2在腫瘤研究中被學(xué)者廣泛關(guān)注。
　　 有報(bào)道，腎癌

4、組織中EphA2高表達(dá)可能與腎癌術(shù)后無(wú)瘤生存期有關(guān)，但關(guān)于EphA2及配體EphrinA1相互作用的生物學(xué)變化及配受體在腎癌中表達(dá)和機(jī)制研究國(guó)內(nèi)外報(bào)道較少。一般認(rèn)為腫瘤組織類型及惡性程度與疾病的轉(zhuǎn)歸和預(yù)后有關(guān)，在腎癌的不同病理類型中以腎透明細(xì)胞癌所占比例較高，為此，本課題通過(guò)對(duì)EphA2及其配體EphrinA1在腎透明細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及與腎癌臨床病理特征、E-cadherin和微血管密度（MVD）關(guān)系的研究，探討EphA2及其配體Ep

5、hrinA1在腎癌轉(zhuǎn)移中的作用；并通過(guò)人工配體EphrinA1-Fc對(duì)人腎透明細(xì)胞癌786-O細(xì)胞系和裸鼠人腎癌細(xì)胞移植瘤干預(yù)和治療研究，探討EphA2與配體EphrinA1結(jié)合的生物學(xué)效應(yīng)及其抗腫瘤的分子機(jī)制，為EphA2/EphrinA1在腎癌中表達(dá)及其在腎癌轉(zhuǎn)移中的作用機(jī)制研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 第一部分 EphA2/EphrinA1在腎癌中的表達(dá)及生物學(xué)意義
　　 目的：通過(guò)檢測(cè)EphA2、EphrinA1在正

6、常腎組織和腎透明細(xì)胞癌組織中蛋白和基因表達(dá)情況，探討其在腎癌高表達(dá)的機(jī)制。
　　 方法：采用半定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)22例腎癌組織和12例非腎癌正常腎組織中EphA2和EphrinA1的基因及蛋白表達(dá)情況，并對(duì)其進(jìn)行比較和相關(guān)分析。
　　 小結(jié)：EphA2和EphrinA1蛋白高表達(dá)于腎癌組織，其機(jī)制除與基因表達(dá)上調(diào)有關(guān)外，蛋白質(zhì)生物學(xué)異常也可能是導(dǎo)致其升高的重要因素，提示EphA2和E

7、phrinA1蛋白高表達(dá)在腫瘤發(fā)病中可能具有重要意義。
　　 第二部分 EphA2/EphrinA1在腎癌轉(zhuǎn)移中的作用
　　 目的：通過(guò)對(duì)EphA2及其配體EphrinA1在腎癌組織中的表達(dá)與腎癌患者臨床病理特征、E-cadherin和MVD的關(guān)系研究，探討EphA2及其配體EphrinA1在腎癌轉(zhuǎn)移中的作用。
　　 方法：利用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)68例腎透明癌組織、24例正常腎組織中EphA2、EphrinA1和

8、E-cadherin的表達(dá)；并采用CD34抗體標(biāo)記微血管內(nèi)皮細(xì)胞，計(jì)算微血管密度（MVD）。分析EphA2、EphrinA1蛋白的表達(dá)與腎癌臨床病理特征、E-cadherin、MVD之間的關(guān)系。
　　 小結(jié)：EphA2和EphrinA1蛋白高表達(dá)于腫瘤高分期組、高分級(jí)組和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，與E-cadherin蛋白表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)，與MVD呈顯著正相關(guān)，提示EphA2和EphrinA1蛋白的高表達(dá)預(yù)示腫瘤惡性程度的增加，其機(jī)制可能通

9、過(guò)影響或協(xié)同E-cadherin和微血管生成來(lái)實(shí)現(xiàn)的。
　　 第三部分 EphrinA1-Fc對(duì)人腎透明癌786-O細(xì)胞系抗腫瘤效應(yīng)機(jī)制的研究
　　 目的：通過(guò)人工可溶性配體EphrinA1-Fc干預(yù)人腎透明細(xì)胞癌786-O細(xì)胞系抗腫瘤效應(yīng)及其分子機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究，探討EphA2在腫瘤細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移中的作用及機(jī)制。
　　 方法：應(yīng)用可溶性配體EphrinA1-Fc對(duì)人腎透明細(xì)胞癌786-O細(xì)胞系進(jìn)行體外干預(yù)實(shí)驗(yàn)，觀

10、察不同時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞形態(tài)學(xué)的變化，對(duì)不同時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞內(nèi)EphA2和ERK1/2的磷酸化程度進(jìn)行分析，并觀察可溶性配體反復(fù)刺激786-O后的細(xì)胞增殖情況。
　　 小結(jié)：EphrinA1-Fc能抑制786-O細(xì)胞株的增殖、降低細(xì)胞黏附，其機(jī)制可能是通過(guò)影響胞內(nèi)EphA2、ERK磷酸化實(shí)現(xiàn)的。
　　 第四部分 EphrinA1-Fc對(duì)裸鼠人腎癌細(xì)胞移植瘤的影響
　　 目的：探討EphrinA1-Fc對(duì)裸鼠人腎癌細(xì)胞移植瘤的影

11、響及其作用機(jī)制。
　　 方法：將表達(dá)EphA2抗原陽(yáng)性的人腎透明細(xì)胞癌786-O細(xì)胞株體外培養(yǎng)后接種于裸鼠皮下，建立動(dòng)物移植瘤模型，觀察實(shí)驗(yàn)組（瘤周注射EphrinA1-Fc）和對(duì)照組（瘤周注射IgG-Fc）移植瘤的生長(zhǎng)情況，并采用免疫組化法檢測(cè)EphA2、E-cadherin及MVD的表達(dá)情況。
　　 小結(jié)：表達(dá)EphA2陽(yáng)性的腎透明細(xì)胞癌786-O具有致瘤性，但成瘤率低且成瘤時(shí)間長(zhǎng)；瘤周注射EphrinA1-Fc可抑

12、制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)，其機(jī)制可能通過(guò)增加E-cadherin蛋白表達(dá)和抑制腫瘤血管生成實(shí)現(xiàn)的，反證了EphA2和EphrinA1的高表達(dá)可能通過(guò)促進(jìn)細(xì)胞增殖、降低細(xì)胞與細(xì)胞黏附、促進(jìn)血管生成促進(jìn)人類腎癌的發(fā)生。
　　 結(jié)論：
　　 1、EphA2/EphrinA1基因和蛋白高表達(dá)于腎癌組織。其蛋白高表達(dá)的機(jī)制可能是自身降解下降、基因表達(dá)上調(diào)共同參與的結(jié)果。
　　 2、EphA2/EphrinA1基因和蛋白高表達(dá)促進(jìn)了

13、腎癌細(xì)胞增殖、腫瘤新生血管生成，增強(qiáng)了腫瘤細(xì)胞與ECM黏附，削弱了細(xì)胞間連接，從而促進(jìn)人類腎癌的發(fā)生和轉(zhuǎn)移。
　　 3、人工可溶性配體EphrinA1-Fc能抑制腎癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，為生物靶向治療提供了動(dòng)物實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 4、EphA2和EphrinA1蛋白的高表達(dá)預(yù)示腎癌細(xì)胞侵襲能力強(qiáng)。聯(lián)合檢測(cè)EphA2、EphrinA1和E-cadherin三種蛋白的表達(dá)對(duì)于評(píng)價(jià)腎癌的惡性程度、判斷其轉(zhuǎn)移的危險(xiǎn)性，可能具有一定的參考價(jià)