外周血中性粒細(xì)胞膜堿性磷酸酶的檢測在再生障礙性貧血中的價值研究.pdf

1、目的：
　　本研究應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測再生障礙性貧血(Aplastic anemia，AA)患者外周血中性粒細(xì)胞膜堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase expression on the membrane of neutrophils，mNAP)的表達(dá)，探討其在AA診斷中的價值及mNAP升高的潛在機制。
　　方法：
　　1.收集2014年8月至2015年12月連云港市第一人民醫(yī)院收治初診全血細(xì)胞減少患者1

2、98例，所有入選患者的血常規(guī)均符合：Hb<100g/L、RBC<3.5×1012/L、WBC<4.0×109/L、PLT<100×109/L。經(jīng)臨床癥狀體征、實驗室檢查、骨髓細(xì)胞學(xué)檢查及病理診斷確診為AA患者52例，非AA導(dǎo)致全血細(xì)胞減少患者146例作為疾病對照組。健康對照組100例來自健康體檢者。采集所選標(biāo)本乙二胺四乙酸二鉀（EDTA-K2）抗凝血2ml，流式檢測中性粒細(xì)胞mNAP,結(jié)果以每個細(xì)胞結(jié)合的抗體數(shù)(antibodies b

3、ound per cell，AB/c)表示。比較組間差異。
　　2.用流式檢測AA組外周血mNAP表達(dá)水平，采用受試者工作特征(Receiver operating characteristic，ROC)曲線評價mNAP對AA的診斷價值。
　　3. ELISA法檢測各組別血清中粒細(xì)胞集落刺激因子(granulocyte colony stimulating factor,G-CSF）濃度，比較并分析各組間差異。
　　4

4、.體外分離中性粒細(xì)胞，并與G-CSF共培養(yǎng)，流式細(xì)胞術(shù)檢測中性粒細(xì)胞膜NAP的表達(dá)，觀察G-CSF對NAP表達(dá)的誘導(dǎo)作用。
　　5.統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS17.0軟件，正態(tài)分布計量數(shù)據(jù)采用(_χ± s)表示，組間比較采用方差分析，偏態(tài)分布數(shù)據(jù)以M(P25～P75)表示，組間比較采用Mann-Whitney U檢驗。ROC曲線評價mNAP對AA的診斷效能。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1.AA、非A

5、A疾病對照組和健康對照組mNAP檢測結(jié)果M(P25～P75)分別為13931(11128–21605) AB/c、1875(1119–3119)AB/c、1831(1371–2411)AB/c，三組患者 mNAP表達(dá)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。AA組mNAP表達(dá)顯著高于非AA組及健康對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。非AA疾病對照組與健康對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　2.ROC曲線分析結(jié)果表明，

6、mNAP診斷AA的ROC曲線下面積為0.95，在最佳切點6388 AB/c時，mNAP診斷敏感性為90.90％(95%CI0.83-0.96)、特異性為96.10%(95%CI0.86-0.99)，擬然比23.2。陽性預(yù)測值（PPV）88.7%、陰性預(yù)測值（NPV）99.5%。
　　3.AA組、疾病對照組和健康對照組血清G-CSF濃度（_χ± s）為467.74±186.10 pg/ml、110.23±86.00 pg/ml、63

7、.65±38.71 pg/ml，AA組高于疾病對照組和健康對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；疾病對照組與健康對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　4.用G-CSF培養(yǎng)體外分離出的中性粒細(xì)胞24小時后，流式檢測中性粒細(xì)胞膜上NAP的表達(dá)。實驗組即經(jīng)過G-CSF培養(yǎng)后，mNAP值9200.00±1276.71 AB/c，對照組即未加G-CSF，mNAP值2106.67±280.06 AB/c，P<0.01，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。