含苯硼酸結(jié)構(gòu)的納米粒子制備及其對蛋白質(zhì)檢測的應(yīng)用研究.pdf

1、蛋白質(zhì)廣泛存在于體液中，可作為象征人體健康的標(biāo)準(zhǔn)，用作診斷的生物標(biāo)記物。將被測蛋白質(zhì)的對應(yīng)識別分子引入檢測體系，可作為響應(yīng)機(jī)制的觸發(fā)點(diǎn)。本文引入蛋白質(zhì)誘導(dǎo)納米粒子親疏水性變化機(jī)制作為分子識別，疏水片段硼酸基團(tuán)與ARS絡(luò)合反應(yīng)為信號導(dǎo)出，構(gòu)建蛋白質(zhì)檢測機(jī)制。
　　1.本文用點(diǎn)擊化學(xué)反應(yīng)合成末端具有生物素的大分子鏈轉(zhuǎn)移試劑，通過可逆加成-斷裂鏈轉(zhuǎn)移聚合(RAFT聚合)調(diào)節(jié)投料比例，得到聚苯硼酸丙烯酰胺(PAAPBA)為疏水片段的三種不

2、同嵌段比例的兩親性聚合物(Biotin-PEG-block-PAAPBA)。通過疏水相互作用，兩親性聚合物自組裝形成100～300nm的納米粒子，利用被識別蛋白質(zhì)與納米粒子外殼的識別分子結(jié)合，從而產(chǎn)生粒子整體親疏水性平衡變化，粒子松散而使苯硼酸部分裸露，進(jìn)而與ARS形成熒光生色團(tuán)，作為檢測信號導(dǎo)出方式，利用此納米粒子檢測模型蛋白鏈霉親和素，檢測限(LOD)可達(dá)32.50ng·mL-1。
　　2.基于上述方案已實(shí)現(xiàn)的定量檢測，本文進(jìn)

3、一步優(yōu)化檢測體系，建立可視化定性檢測新機(jī)制。兩親性嵌段聚合物(B iotin-P EG-b lock-PAAPBA)與ARS先配位反應(yīng)后，自組裝可以形成黃色納米粒子。在蛋白質(zhì)影響粒子親疏水性平衡的同時，引入環(huán)糊精分子作為外加刺激，并與疏水內(nèi)核的硼酸-ARS絡(luò)合物反應(yīng)，競爭置換出游離的紫色ARS，促進(jìn)粒子進(jìn)一步瓦解，實(shí)現(xiàn)溶液顏色由黃到紫的轉(zhuǎn)變。根據(jù)加入蛋白質(zhì)的納米粒子溶液與無蛋白質(zhì)納米粒子溶液的熒光發(fā)射信號差值作蛋白檢測標(biāo)準(zhǔn)曲線，同時實(shí)現(xiàn)