調(diào)脂顆粒對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的自噬的干預(yù)研究.pdf

1、目的:研究調(diào)脂顆粒對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(Human umbilical vascular endothelialcell，HUVEC)在細(xì)胞、蛋白質(zhì)、分子水平自噬的影響，從而探討調(diào)脂顆?？箘?dòng)脈粥硬化的作用機(jī)制。
　　方法:運(yùn)用血清藥理學(xué)方法，以調(diào)脂顆粒含藥血清處理生理狀態(tài)及病理狀態(tài)（過(guò)度自噬狀態(tài)）下的肉皮細(xì)胞。通過(guò)MTT比色法檢測(cè)調(diào)脂顆粒含藥血清對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。Western blot檢測(cè)內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)自噬相關(guān)蛋白LC3-Ⅱ、Be

2、clin-1的相對(duì)表達(dá)量變化，免疫熒光法檢測(cè)內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)自噬小體的數(shù)目變化，SYBR GreenⅠ實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)自噬相關(guān)基因mTOR、ATG5、ATG7、Beclin-1的相對(duì)表達(dá)量變化。
　　結(jié)果:調(diào)脂顆粒含藥血清處理內(nèi)皮細(xì)胞后，較空白組，細(xì)胞活力無(wú)明顯改變，自噬相關(guān)蛋白LC3-Ⅱ的相對(duì)表達(dá)上調(diào)，LC3自噬小體數(shù)量增加(p＜0.05)，Beclinl在分子及蛋白層面表達(dá)均無(wú)明顯差異(p＞0.05)。雷帕霉素(Ra

3、pamycin，Rapa)處理內(nèi)皮細(xì)胞后，較空白組比較自噬相關(guān)蛋白及相關(guān)基因表達(dá)上調(diào)。調(diào)脂顆粒含藥血清聯(lián)合雷帕霉素處理HUVEC后，細(xì)胞活力無(wú)明顯改變，較雷帕霉素單獨(dú)處理比較，自噬相關(guān)蛋白LC3-Ⅱ的相對(duì)表達(dá)顯著下降，LC3自噬小體數(shù)量明顯減少(p＜0.05或p＜0.01)，各自噬相關(guān)基因表達(dá)均上調(diào)，Beclin-1在分子及蛋白層面表達(dá)均無(wú)明顯差異(p＞0.05)。3MA(6-氨基-3-甲基嘌呤，3-Metllyladenine)聯(lián)合雷

4、帕霉素組與雷帕霉素組在各蛋白及分子水平存在明顯差異(p＜0.05)，但與各濃度調(diào)脂顆粒含藥血清聯(lián)合雷帕霉素處理組無(wú)明顯差異(p＞0.05)。
　　結(jié)論:在蛋白及分子水平層面，調(diào)脂顆粒上調(diào)生理狀態(tài)下內(nèi)皮細(xì)胞自噬，抑制病理狀態(tài)下內(nèi)皮細(xì)胞自噬，驗(yàn)證了調(diào)脂顆?？纱龠M(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞適度自噬，抑制內(nèi)皮細(xì)胞過(guò)度自噬，這可能是其抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用機(jī)制之一。各調(diào)脂顆粒藥物組與相關(guān)對(duì)照組的LC3表達(dá)存在差異，而B(niǎo)eclin1的表達(dá)無(wú)明顯差異，這說(shuō)明調(diào)脂顆