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文檔簡介
1、研究背景
吸煙是心血管疾病發(fā)生發(fā)展的一個獨立而重要的危險因素。吸煙可以損傷血管內(nèi)皮細胞,導致內(nèi)皮細胞功能障礙,引起體內(nèi)纖溶系統(tǒng)的異常變化,從而增加血栓形成的風險。
眾所周知,血液的纖溶能力主要取決于組織型纖溶酶原激活劑(t-PA)及其快速抑制劑纖溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)的活性。大量文獻表明,糖尿病、冠心病可伴發(fā)纖溶功能異常,而有關(guān)吸煙引起的纖溶變化研究尚少。尼古丁是煙草的主要致病成分之一,其通過損
2、傷內(nèi)皮細胞導致血液纖溶功能下降,但該作用的具體機制尚不十分清楚。蛋白激酶C(PKC)為細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導的重要遞質(zhì),廣泛參與細胞的分泌、增殖、分化等功能,其作用日益受到關(guān)注。目前,尼古丁所致內(nèi)皮細胞纖溶功能下降與PKC通道的關(guān)系研究較少,且結(jié)論不一。辛伐他汀為臨床常用的血脂調(diào)節(jié)劑,研究表明該藥還具有內(nèi)皮保護、抗炎、促進纖溶等作用。辛伐他汀是否對尼古丁介導的人臍靜脈內(nèi)皮細胞纖溶功能紊亂具有保護作用及其可能機制目前尚無報道。
目的
3、
研究尼古丁及不同濃度的PKC 阻斷劑Staurosporine (STS)作用于人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVECs)后其t-PA、PAI-1蛋白及mRNA表達的變化,探討尼古丁對HUVECs 纖溶影響的可能機制;采用不同濃度的辛伐他汀預(yù)處理內(nèi)皮細胞,了解該藥對尼古丁介導的HUVECs表達 t-PA、PAI-1蛋白及mRNA的影響。
方法
1.實驗分組 HUVECs株培養(yǎng)后接種于25c m25c m
4、的培養(yǎng)瓶中,隨機分為①對照組:
培養(yǎng)液中加入與尼古丁相同體積的無菌PBS 液;②尼古丁組:培養(yǎng)液中加入終濃度為mol/ L的尼古??;③STS 干預(yù)組:培養(yǎng)液中分別加入終濃度為20、50、mol/ L的STS 預(yù)處理細胞30min,再加入mol/ L的尼古丁共同培養(yǎng);④辛伐他汀干預(yù)組:培養(yǎng)液中分別加入終濃度為1、10、mol/ L的辛伐他汀預(yù)處理細胞2h,再加入mol/ L的尼古丁共同培養(yǎng)。
2.檢測方法同步培
5、養(yǎng)24h后收集各組的細胞及上清液,采用酶聯(lián)免疫吸附雙抗體夾心法(ELISA)測定各組細胞上清液中t-PA、PAI-1蛋白濃度,逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)法(RT-PCR)檢測各組細胞中t-PA和PAI-1mRNA的表達水平。
結(jié)果
1.尼古丁組PAI-1mRNA及蛋白含量〔0.9690.112,(66.0512.890)ng/ ml 〕與對照組〔0.0990.013,(38.660±1.749)ng/ ml 〕比較
6、顯著升高,差異均有統(tǒng)計學意義(均P0.01)。尼古丁組t-PA mRNA的表達(0.0990.011)與對照組(1.0110.132)比較明顯下降,差異有統(tǒng)計學意義(P0.01);尼古丁組t-PA蛋白(0.7250.211)ng/ ml表達與對照組(1.0820.131)ng/ ml 比較,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
2.STS 干預(yù)結(jié)果各濃度STS 干預(yù)組PAI-1mRNA及蛋白〔0.5880.077,(61.9
7、225.821)ng/ ml 〕、〔0.5300.070,(57.9768.009)ng/ ml 〕、〔0.2220.029,(43.2911.878)ng/ ml 〕均較尼古丁組降低,差異均有統(tǒng)計學意義(均P0.01);各STS 干預(yù)組PAI-1mRNA及蛋白高于對照組,差異均有統(tǒng)計學意義(均P0.01)。Mol/ LSTS組t-PA mRNA(0.1840.023)與尼古丁組比較,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),50、100μmo
8、l/ L STS組t-PA mRNA (0.2930.037,0.4120.053)較尼古丁組升高,但仍低于對照組,差異均有統(tǒng)計學意義(均P0.01);各組t-PA蛋白與對照組及尼古丁組比較,差異均無統(tǒng)計學意義(均P>0.05)。
3.辛伐他汀干預(yù)結(jié)果各濃度辛伐他汀干預(yù)組PAI-1mRNA及蛋白〔0.5810.095,(60.7882.500)ng/ ml 〕、〔0.5110.084,(54.9553.971)ng/ ml
9、 〕、〔0.02190.037,(41.9244.472)ng/ ml 〕均較尼古丁組降低,差異均有統(tǒng)計學意義(均P0.01),以mol/ L 辛伐他汀組降低最為顯著,與對照組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。Mol/ L辛伐他汀組t-PA mRNA (0.1870.025)與尼古丁組比較,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05);10、100μmol/ L 辛伐他汀組t-PA mRNA (0.2780.038)、(0.3320.046)較
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