血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子密度梯度對內(nèi)皮細(xì)胞遷移行為的調(diào)控.pdf

1、內(nèi)皮細(xì)胞的遷移對于血管再生至關(guān)重要，涉及胚胎發(fā)育、傷口愈合、組織再生和腫瘤生長等諸多生理、病理學(xué)過程?；瘜W(xué)趨觸性是調(diào)控內(nèi)皮細(xì)胞遷移的重要途徑之一，可通過構(gòu)建梯度材料調(diào)控細(xì)胞粘附、鋪展和遷移等過程。
　　為了研究材料表面生長因子密度梯度對內(nèi)皮細(xì)胞粘附和遷移的影響，本文利用注射法在硅片表面構(gòu)建血管內(nèi)皮生長因子（Vascularendothelialgrowthfactor,VEGF）密度梯度，對制備過程進(jìn)行了優(yōu)化，并對基材進(jìn)行了表征，

2、進(jìn)而考察了內(nèi)皮細(xì)胞在梯度基材表面的粘附和遷移的行為。全文包含以下三方面研究內(nèi)容：
　　1、VEGF均勻密度表面的制備和表征：首先，以硅烷偶聯(lián)劑3-(2,3-環(huán)氧丙氧)丙基三甲氧基硅烷（3-glycidoxypropyltrimethoxysilane,GPTMS）浸泡硅片，形成端羥基的單分子層自組裝；進(jìn)而，以二氫-3-[3-(三乙氧基硅基)丙基]呋喃-2,5-二酮（3-triethoxysilylpropylsuccinicanh

3、ydride,TESPSA）反浸，得到含端羥基/羧基的復(fù)合自組裝單分子層。利用GPTMS與硅片的相互作用時(shí)間的不同，可得到系列不同羧基(-COOH)密度的表面。羧基官能團(tuán)經(jīng)過活化后，與血管內(nèi)皮生長因子共價(jià)鍵合，從而得到接枝VEGF的表面。我們利用甲苯胺藍(lán)（Toluidineblue,TBO）法、接觸角和血管內(nèi)皮生長因子酶聯(lián)免疫檢測試劑盒（Enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA）表征了羧基密度和VEGF

4、密度與GPTMS反應(yīng)時(shí)間的關(guān)系，結(jié)果證實(shí)：羧基密度和VEGF密度隨GPTMS反應(yīng)時(shí)間增加而降低，并且呈線性變化。
　　2、VEGF梯度密度表面的制備和表征：基于VEGF密度與GPTMS反應(yīng)時(shí)間的線性關(guān)系，通過注射法，利用微流泵，將GPTMS漸進(jìn)滴入反應(yīng)體系中，構(gòu)建羧基梯度表面，通過活化后得到VEGF密度梯度。X-射線光電子能譜儀（X-rayphotoelectronspectroscopy,XPS）證實(shí)了VEGF密度梯度的形成、免

5、疫熒光染色的激光共聚焦顯微鏡（Confocallaserscanningmicroscopy,CLSM）觀測到明顯的VEGF密度梯度存在，密度從54到132ng/cm2，斜率為7.8ng/cm2/mm。
　　3、VEGF梯度密度表面誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞遷移：通過免疫組化法染色細(xì)胞核和細(xì)胞骨架肌動(dòng)蛋白，利用激光共聚焦顯微鏡觀察內(nèi)皮細(xì)胞的形態(tài)。在均勻VEGF表面，內(nèi)皮細(xì)胞骨架蛋白纖維雜亂分布，毫無規(guī)律；而在VEGF梯度密度表面培養(yǎng)的內(nèi)皮細(xì)胞，

6、均表現(xiàn)為細(xì)胞骨架蛋白纖維趨向于沿著VEGF密度增加的方向。同時(shí)，利用活細(xì)胞工作站，實(shí)時(shí)觀測、重建內(nèi)皮細(xì)胞運(yùn)動(dòng)軌跡，并對細(xì)胞運(yùn)動(dòng)性相關(guān)的參數(shù)，包括總遷移距離、凈位移、趨化指數(shù)（Chemotacticindex,CI）和向梯度方向遷移的細(xì)胞個(gè)數(shù)占全部細(xì)胞的比值等進(jìn)行了分析。在VEGF密度梯度上的內(nèi)皮細(xì)胞表現(xiàn)出極大的極性分布，72％的細(xì)胞向VEGF密度較高的一側(cè)移動(dòng)。但是，均勻表面和梯度表面對于細(xì)胞遷移的速率沒有明顯影響。
　　本論文提