人工血管攜腺病毒介導(dǎo)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子基因?qū)?nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)的影響.pdf

1、背景： 小口徑人工血管移植術(shù)后出現(xiàn)內(nèi)膜增生和血栓形成，導(dǎo)致通暢率不理想，主要是因?yàn)槿斯ぱ鼙砻嫒狈ν暾膬?nèi)皮層。目前已經(jīng)證實(shí)通過(guò)人工血管表面快速內(nèi)皮化可以減少再狹窄的發(fā)生。人工血管內(nèi)皮化的研究已經(jīng)從種植內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)展到基因分子水平。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)是誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)作用最強(qiáng)、特異性最高的一種生長(zhǎng)因子。VEGF蛋白涂層和基因質(zhì)粒轉(zhuǎn)染都有其明顯的缺陷。而腺病毒作為載體轉(zhuǎn)染取得了很好的效果。 目的： 觀察

2、人工血管攜帶腺病毒介導(dǎo)的VEGF基因轉(zhuǎn)染內(nèi)皮細(xì)胞的效果、VEGF基因和蛋白的表達(dá)以及對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。 材料和方法： 1.ad5-EGFP轉(zhuǎn)染EAhy926轉(zhuǎn)染率的測(cè)定。 2.人工血管攜帶腺病毒在靜水中的釋放情況。 3.人工血管上內(nèi)皮細(xì)胞的貼附情況。 4.ad5-VEGF165-IRES-EGFP轉(zhuǎn)染EAhy926，RT-PCR半定量檢測(cè)VEGF基因水平表達(dá)。 5.人工血管攜帶ad5-

3、VEGF165-IRES-EGFP轉(zhuǎn)染EAhy926，ELISA法檢測(cè)VEGF蛋白水平表達(dá)。 6.人工血管攜帶ad5-VEGF165-IRES-EGFP轉(zhuǎn)染EAhy926，MTT法檢測(cè)對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。 結(jié)果： 1.ad5轉(zhuǎn)染率隨MOI的增加而增加，MOI 200時(shí)達(dá)到87.3％。 2.人工血管上消化下來(lái)發(fā)熒光的細(xì)胞在最初的1h內(nèi)，下降最為明顯。稀釋液中基本沒(méi)有發(fā)熒光的細(xì)胞。 3.電鏡顯示內(nèi)皮

4、細(xì)胞貼附在人工血管上。 4.ad5-VEGF165轉(zhuǎn)染組RT-PCR有VEGF基因的表達(dá)，第3天比第1天表達(dá)強(qiáng)烈。對(duì)照組沒(méi)有表達(dá)。 5.ad5-VEGF165轉(zhuǎn)染組上清液中有VEGF蛋白的表達(dá)，呈上升趨勢(shì)第5天達(dá)峰后開(kāi)始下降。對(duì)照組沒(méi)有表達(dá)。 6.ad5-VEGF165轉(zhuǎn)染組OD值呈快速上升趨勢(shì)，對(duì)照組上升緩慢。 結(jié)論： 1.ad5轉(zhuǎn)染EAhy926的最適MOI為200。 2.人工血管上攜

5、帶的病毒靜水中能在人工血管上保留1h左右，這是一個(gè)逐漸釋放的過(guò)程，而不是瞬時(shí)釋放。 3.內(nèi)皮細(xì)胞能夠附著在人工血管上。 4.ad5-VEGF165-IRES-EGFP能轉(zhuǎn)染EAhy926，hVEGF165基因水平成功表達(dá)。 5.人工血管攜帶ad5-VEGF165-IRES-EGFP能轉(zhuǎn)染EAhy926，hVEGF165蛋白水平成功表達(dá)6.人工血管攜帶ad5-VEGF165-1RES-EGFP能促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的增殖。