PEG（聚乙二醇）密度梯度對內(nèi)皮細胞遷移行為的誘導作用.pdf

1、內(nèi)皮細胞遷移對諸如胚胎血管生成、傷口愈合、組織再生、腫瘤生長等生理過程至關(guān)重要，受梯度生化信號影響。為了研究材料表面密度梯度對內(nèi)皮細胞粘附及遷移的影響，本文利用微注射法在硅片表面構(gòu)建連續(xù)聚乙二醇(Poly(ethylene glycol))密度梯度，并對PEG梯度表面材料制備過程進行了優(yōu)化及表征，進而考察了內(nèi)皮細胞在梯度基材表面的粘附和遷移的行為。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴PEG均勻密度表面的制備和表征：首先，以硅烷偶聯(lián)劑3-(

2、2，3-環(huán)氧丙氧)丙基三甲氧基硅烷(3-glycidoxypropyltrimeth oxysilane，GPTMS)浸泡硅片不同時間，形成不同 GPTMS密度梯度材料；隨后，用3-氨基丙基-三甲氧基硅烷(3-Aminopropyltriethoxysilane，APTES)反浸，得到一系列不同端氨基(-NH2)密度的硅表面；最后，通過化學接枝將PEG接枝到APTES硅表面。我們利用XPS法和接觸角表征了氨基密度、PEG密度與 GPTM

3、S反應時間的關(guān)系，結(jié)果顯示：氨基密度和PEG密度均隨著GPTMS反應時間的增加而降低。⑵PEG密度梯度表面的制備和表征：根據(jù)上述 PEG的接枝密度與 GPTMS反應時間的反比例關(guān)系，我們利用微注射法并控制微流泵的GPTMS注射速度，制備了表面氨基密度梯度表面。然后，在氨基梯度表面上接枝PEG，得到PEG密度梯度表面。XPS和橢圓偏光法證實了沿硅片方向上PEG梯度的成功構(gòu)建，梯度范圍為0.56chains/nm2到0.75chains/n

4、m2。⑶PEG密度梯度表面誘導內(nèi)皮細胞遷移：我們將內(nèi)皮細胞分別接種于 PEG密度梯度表面和PEG密度均勻表面進行體外培養(yǎng)，以熒光試劑盒分別染色細胞核和細胞骨架肌動蛋白，并以激光共聚焦顯微鏡（CLSM）觀察內(nèi)皮細胞的形態(tài)。結(jié)果表明：在均勻PEG密度材料表面，內(nèi)皮細胞骨架蛋白纖維分布雜亂，纖維絲沿不同方向分布；而在PEG梯度密度材料表面培養(yǎng)的內(nèi)皮細胞，其細胞骨架蛋白纖維均趨于沿著PEG密度減小的方向分布。此外，我們利用活細胞顯微鏡實時觀察內(nèi)