黏著斑激酶FAK與蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶PTPα突變體生物學(xué)活性的研究.pdf

1、蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶α(PTPα)是受體型PTPs(RPTPs)家族中的一員，分子量為130kD，它含有兩個(gè)連續(xù)的催化結(jié)構(gòu)域(D1和D2)，但正常條件下只有D1具有催化活性，而D2僅有較弱的磷酸酶活性。許多研究都證明體內(nèi)或體外PTPαα能特異催化c-Src的C-末端527位酪氨酸殘基去磷酸化，使c-Src持續(xù)激活，而Src的異常激活與腫瘤的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切。黏著斑激酶(focaladhesionkinase，F(xiàn)AK)是非受體酪氨酸磷酸激酶

2、(PTK)的一種，分子量為120kD，它沒(méi)有經(jīng)典的SH2和SH3結(jié)構(gòu)域，但存在多個(gè)磷酸化位點(diǎn)，其中Tyr397為主要的自身磷酸化位點(diǎn)，Tyr397磷酸化后能被Src識(shí)別結(jié)合而激活，參與細(xì)胞黏附、侵襲、遷移、增殖及凋亡等多種生物學(xué)行為。
　　為進(jìn)一步了解PTPα及其下游蛋白FAK與腫瘤的關(guān)系，我們?cè)噲D從腫瘤標(biāo)本中找尋PTPα和FAK的突變體，然后通過(guò)一系列分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)如質(zhì)粒構(gòu)建、WesternBlot、免疫共沉淀、Sr

3、c激酶活性測(cè)定、PTPα磷酸酶活性測(cè)定、軟瓊脂集落形成實(shí)驗(yàn)，細(xì)胞遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)等對(duì)PTPα和FAK突變體的蛋白質(zhì)產(chǎn)物其生物學(xué)活性進(jìn)行研究。
　　根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，我們發(fā)現(xiàn)了PTPα245，它是缺失兩個(gè)催化結(jié)構(gòu)域的PTPα，存在PTPα245的腫瘤標(biāo)本中Src磷酸化水平降低，即Src被異常激活;并且PTPα245能通過(guò)與野生型PTPα之間的相互作用導(dǎo)致Src的去磷酸化而激活，使過(guò)表達(dá)該突變體的REF細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化。另外我們發(fā)現(xiàn)了多種F