家蠶蛋白酪氨酸磷酸酶BmPTP鑒定與免疫功能研究.pdf

1、蛋白酪氨酸磷酸酶(BmPTP)是細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)以及細(xì)胞周期的重要調(diào)控分子，同時(shí)在細(xì)胞生長(zhǎng)、繁殖、分化、轉(zhuǎn)化、免疫等諸多領(lǐng)域也發(fā)揮著重要作用。關(guān)于該酶的研究主要集中在哺乳動(dòng)物中，昆蟲(chóng)中蛋白酪氨酸磷酸酶的研究還很少，尤其缺乏免疫功能方面的研究。本文通過(guò)生物信息學(xué)的方法對(duì)家蠶中的蛋白酪氨酸磷酸酶進(jìn)行了鑒定和分類，同時(shí)確定了對(duì)BmPTP免疫功能的研究。研究通過(guò)感染病菌后檢測(cè)BmPTP的表達(dá)變化，并通過(guò)過(guò)表達(dá)以及干涉BmPTP的方式檢測(cè)該基因在Bm

2、E細(xì)胞中的免疫功能變化，然后對(duì)家蠶個(gè)體進(jìn)行了干涉實(shí)驗(yàn)，以對(duì)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。本實(shí)驗(yàn)主要的研究結(jié)果如下:
　　1.家蠶蛋白酪氨酸磷酸酶的鑒定與分類
　　從日本家蠶數(shù)據(jù)庫(kù)（http://sgp.dna.affrc.go.jp/KAI KObase/）與本實(shí)驗(yàn)室家蠶數(shù)據(jù)庫(kù)（http://www.silkdb.org/silkdb/）中篩選到了46個(gè)含有蛋白酪氨酸磷酸酶催化結(jié)構(gòu)域的序列，最終獲得了41個(gè)基因的完整序列。對(duì)獲得的

3、41個(gè)完整基因進(jìn)行了進(jìn)化樹(shù)比對(duì)，并按照催化結(jié)構(gòu)域結(jié)構(gòu)的不同對(duì)它們進(jìn)行了分類。同時(shí)確定了以BmPTP(BMgn016959)為免疫功能研究對(duì)象。并對(duì)其進(jìn)行了時(shí)期表達(dá)譜分析和組織表達(dá)譜分析。
　　2.BmPTP功能研究
　　首先，檢測(cè)了BmPTP在細(xì)胞及個(gè)體感染黑胸?cái)⊙挎邨U菌（Bacillusbombyseptieus），沙雷氏菌（Serratia marcescens）和家蠶BmNPV（Bombyx morinucleopo

4、lyhedrovirus）病毒后的表達(dá)變化，發(fā)現(xiàn)了在家蠶在感染BmNPV病毒后，BmPTP在細(xì)胞及個(gè)體中48 h后表達(dá)量有明顯的上升;在細(xì)菌感染后的某些組織中BmPTP的表達(dá)量也有明顯的變化。為了對(duì)BmPTP在免疫功能上的作用進(jìn)行進(jìn)一步探究，構(gòu)建了BmPTP真核及原核表達(dá)載體，并通過(guò)western blot和考馬斯亮藍(lán)染色的方法對(duì)表達(dá)進(jìn)行了檢測(cè)。然后構(gòu)建了蛋白酪氨酸磷酸酶活性檢測(cè)系統(tǒng)，并檢測(cè)到了BmPTP的活性。同時(shí)還合成了BmPTP的