大株紅景天注射液對缺氧-復(fù)氧心肌細胞線粒體功能及動力學(xué)的影響.pdf

1、目的:本實驗用大鼠原代心肌細胞建立心肌細胞缺氧/復(fù)氧(hypoxia/reoxygenation，H/R)損傷模型，探討大株紅景天注射液對線粒體功能及線粒體動力學(xué)相關(guān)蛋白表達的影響，明確其抗心肌細胞H/R損傷的作用及其可能的機制。
　　方法:分離并培養(yǎng)新生SD大鼠原代心肌細胞，選取生長狀態(tài)良好的心肌細胞，隨機分為五組:①空白對照組;②缺氧/復(fù)氧組(H/R組);③后干預(yù)組(H/R組+大株紅景天注射液);④前干預(yù)組(大株紅景天注射液+

2、H/R組);⑤前后干預(yù)組(大株紅景天注射液+H/R組+大株紅景天注射液)。采用四甲基偶氮唑鹽比色法(MTT法)測定大株紅景天注射液對心肌細胞活力的影響，確定最佳給藥濃度;用多功能酶標(biāo)儀測定反映線粒體功能的指標(biāo)變化，包括細胞內(nèi)活性氧(ROS)含量、三磷酸腺苷(ATP)水平、線粒體膜電位(MMP);免疫印跡法(Western blotting)測定線粒體動力學(xué)相關(guān)蛋白OPA1、Drp1以及p-Drp1的表達水平。
　　結(jié)果:
　

3、　1.大株紅景天對H/R損傷的原代心肌細胞ATP、ROS含量的影響與空白對照組相比，H/R組心肌細胞內(nèi)ATP含量明顯降低、ROS含量明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。與H/R組相比，后干預(yù)組、前干預(yù)組及前后干預(yù)組心肌細胞中ATP含量升高、ROS含量降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。前后干預(yù)組心肌細胞內(nèi)ATP含量升高、ROS含量降低，與前干預(yù)組、后干預(yù)組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。前干預(yù)組與后干預(yù)組比較ATP

4、、ROS含量變化無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　2.大株紅景天對H/R損傷的原代心肌細胞MMP的影響與空白對照組相比，H/R組心肌細胞內(nèi)MMP下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。與H/R組相比，后干預(yù)組、前干預(yù)組及前后干預(yù)組心肌細胞中MMP升高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。前后干預(yù)組心肌細胞內(nèi)MMP升高，與前干預(yù)組、后干預(yù)組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。前干預(yù)組與后干預(yù)組比較MMP變化無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0

5、.05)。
　　3.大株紅景天對H/R損傷的原代心肌細胞OPA1蛋白表達的影響與空白對照組相比，H/R組OPA1蛋白表達下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);與H/R組相比，后干預(yù)組、前干預(yù)組及前后干預(yù)組OPA1蛋白表達上調(diào)，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。前干預(yù)組、后干預(yù)組、前后干預(yù)組之間兩兩比較，OPA1蛋白的表達無明顯差異(P＞0.05)。
　　4.大株紅景天對H/R損傷的原代心肌細胞Drp1、p-Drp1蛋白表

6、達的影響各實驗組Drp1蛋白表達量無差異(P＞0.05)，p-Drp1的表達有差異。與空白對照組相比，H/R組p-Drp1蛋白表達上調(diào)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);與H/R組相比，后干預(yù)組、前干預(yù)組及前后干預(yù)組p-Drp1蛋白表達下調(diào)，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。前后干預(yù)組與前干預(yù)組、后干預(yù)組相比，p-Drp1蛋白表達下調(diào)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。前干預(yù)組與后干預(yù)組比較p-Drp1蛋白表達無差異(P＞0.05)。