縮泉丸對糖尿病膀胱病變的作用研究.pdf

1、目的:
　　通過建立DCP小鼠模型，觀察縮泉丸對DCP模型小鼠排尿情況、糖代謝水平及膀胱結(jié)構(gòu)與功能的影響，并運用現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)研究其對DCP小鼠膀胱組織中CHRM3、β3-AR、TRPV1 mRNA以及SP、NK1R、P2X2、P2X3表達(dá)的影響，共同探討縮泉丸對糖尿病膀胱病變的作用及其機(jī)制。
　　方法:
　　1.構(gòu)建DCP模型，觀察縮泉丸對其排尿情況及糖代謝水平的影響。
　　SPF級雄性C57BL/6小鼠，

2、隨機(jī)分為正常組(n=8)及造模組。試驗期間，正常組喂養(yǎng)普通飼料，造模組采用高脂飼料喂養(yǎng)。飼養(yǎng)4周后，造模組按200mg/kg劑量腹腔注射2％的STZ溶液。注射STZ三天后，F(xiàn)BG達(dá)189 mg/dL視造模成功，將造模成功小鼠隨機(jī)分為模型組，陽性組（甲鈷胺片），縮泉丸高、低劑量組，每組8只。注射STZ第9周開始，分別灌胃給藥4周，給藥期間對各組動物體重、飲食、排尿、血糖進(jìn)行監(jiān)測，末次給藥前后進(jìn)行口服葡萄糖耐量試驗，腹主動脈取血測定血清中糖

3、化血清蛋白及胰島素含量，觀察縮泉丸的影響。
　　2.觀察縮泉丸對DCP小鼠膀胱結(jié)構(gòu)與功能的影響
　　末次給藥后使用尿動力學(xué)檢測儀觀察縮泉丸對DCP小鼠膀胱功能的影響;無菌分離膀胱，運用Powerlab生理機(jī)能放大系統(tǒng)研究縮泉丸對膀胱肌條對α，β-me ATP、Carbachol、Capsaicin、KCl誘發(fā)的逼尿肌條舒縮反應(yīng)的影響;將膀胱組織浸入4％多聚甲醛溶液，進(jìn)行H&E染色及MASSON染色，觀察縮泉丸對DCP小鼠膀胱

4、組織病理形態(tài)學(xué)的影響。
　　3.研究縮泉丸對DCP小鼠相關(guān)神經(jīng)受體及神經(jīng)遞質(zhì)的影響
　　利用RT-PCR及免疫熒光技術(shù)，研究縮泉丸對DCP小鼠膀胱組織中CHRM3、β3-AR、TRPV1 mRNA以及SP、NK1R、P2X2、P2X3表達(dá)的影響，闡釋縮泉丸治療糖尿病膀胱病變的作用機(jī)制。
　　結(jié)果:
　　1.各組動物排尿情況及糖代謝水平監(jiān)測結(jié)果
　　DCP模型小鼠體重明顯減輕;飲水量、攝食量、排尿量均顯著增多

5、;血糖水平以及血清中GSP和胰島素含量顯著上升?？s泉丸對DCP小鼠干預(yù)后，體重、飲水量、攝食量以及血清中GSP及胰島素含量無明顯變化，高劑量縮泉丸能明顯減少DCP小鼠排尿量。
　　2.各組動物膀胱結(jié)構(gòu)與功能觀測結(jié)果
　　尿動力學(xué)監(jiān)測結(jié)果表明，DCP模型小鼠漏尿點壓、膀胱最大壓、排尿效率均顯著降低，排尿量、膀胱容量、膀胱順應(yīng)性及殘余尿量明顯升高;縮泉丸可以上調(diào)DCP小鼠膀胱壓力與排尿效率，減少排尿量和殘余尿量，降低膀胱容量及膀

6、胱順應(yīng)性。
　　膀胱離體肌條實驗結(jié)果顯示，DCP模型小鼠膀胱肌條對α，β-me ATP、Carbachol、Capsaicin與KCl的收縮反應(yīng)均顯著下降，且Capsaicin刺激后ATP釋放量明顯減少;縮泉丸高低劑量均可以增強(qiáng)DCP小鼠膀胱肌條對α，β-me ATP、Carbachol與Capsaicin的收縮反應(yīng)強(qiáng)度，并能增加膀胱肌條受Capsaicin刺激所釋放ATP量?？s泉丸高劑量還能增強(qiáng)DCP小鼠膀胱肌條對KCl的收縮反

7、應(yīng)強(qiáng)度，縮泉丸低劑量對KCl的收縮反應(yīng)強(qiáng)度無明顯影響。
　　膀胱組織病理形態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)，DCP小鼠膀胱壁厚及膠原密度明顯下降，并出現(xiàn)肌束排列紊亂，肌細(xì)胞肥大，膠原蛋白及彈性蛋白松散等狀況，經(jīng)縮泉丸干預(yù)后，膀胱組織病理形態(tài)學(xué)得到明顯改善。
　　3.各組動物相關(guān)神經(jīng)受體及神經(jīng)遞質(zhì)表達(dá)情況
　　RT-PCR及免疫熒光實驗結(jié)果表明，DCP模型小鼠膀胱組織中CHRM3、TRPV1mRNA及SP、NK1R、P2X2、P2X3表達(dá)水

8、平均明顯下降;縮泉丸能夠顯著升高DCP小鼠膀胱組織中CHRM3、TRPV1 mRNA及SP、NK1R、P2X2、P2X3表達(dá)水平;各組動物β3-AR mRNA表達(dá)水平未出現(xiàn)顯著性差異。
　　結(jié)論:
　　縮泉丸可以通過肌源性和神經(jīng)源性兩大方面改善DCP小鼠膀胱功能。其機(jī)制可能是:縮泉丸通過升高膀胱組織中CHRM3、TRPV1、NK1R及P2X3受體的表達(dá)，以及促進(jìn)相關(guān)神經(jīng)遞質(zhì)（如ATP、SP）的釋放，從而改善DCP小鼠膀胱失約