呈遞HPV16E7抗原的重組細菌外膜囊泡在TC-1腫瘤模型中的治療性干預(yù).pdf

1、宮頸癌是威脅全球女性健康的第二大惡性腫瘤，在幾乎100％的宮頸癌患者中均檢測到了人乳頭瘤病毒(human papillomavirus，HPV)的存在。除宮頸癌，HPV還可以引起頭頸癌、肛門和生殖道癌等。目前，盡管國際上已有預(yù)防性HPV疫苗獲批準上市，但是鑒于疫苗的接種覆蓋面有限、病毒基因型間交叉保護力有限、以及預(yù)防性疫苗對于已經(jīng)建立的HPV長期感染或腫瘤患者，沒有明顯的治療作用，HPV仍然是人類健康的重大威脅。因此，研發(fā)治療性HPV疫

2、苗，針對癌前病變和腫瘤進行免疫治療，對于控制HPV相關(guān)疾病具有廣闊的應(yīng)用前景。然而，目前治療性HPV疫苗臨床研究普遍缺乏顯著的治療效果。研究顯示，不能夠激發(fā)高水平的特異性細胞免疫應(yīng)答，是腫瘤疫苗設(shè)計中存在的顯著問題。因此，積極開發(fā)新型抗原遞送系統(tǒng)，增強抗原向抗原遞呈細胞的遞送，是提高疫苗激發(fā)的腫瘤抗原特異性細胞應(yīng)答強度，增強腫瘤疫苗臨床效力的重要策略。
　　細菌外膜囊泡(outer membrane vesicles，OMVs)為

3、一種蛋白脂質(zhì)體納米顆粒，直徑為20-250nm，由革蘭氏陰性菌在生長過程中由外膜突起釋放到胞外。OMVs具有成為疫苗載體的諸多特點與優(yōu)勢：如可基因重組改造，可進行大蛋白及多蛋白呈遞，具多種促進抗原遞呈細胞識別的受體，具自佐劑活性，作為一種納米顆粒可以促進向淋巴結(jié)趨化等。此外，B群奈瑟腦膜炎OMVs疫苗的成功臨床應(yīng)用，對于發(fā)展OMVs成為有潛力的疫苗載體有著重要提示作用。近年，有研究者嘗試將外源蛋白整合到OMVs中，例如將肺炎球菌蛋白Ps

4、pA成功呈遞在沙門氏菌的OMVs以抵御肺炎雙球菌的感染，以及我們前期研究中將Omp22蛋白呈遞在大腸桿菌E.coli的OMVs上以抵御鮑曼不動桿菌的感染，展示OMVs經(jīng)基因工程改造，可承載外源大分子抗原蛋白，誘導(dǎo)特異體液免疫應(yīng)答，有效抵御病原菌的攻擊。然而，以大腸桿菌OMVs作為治療性疫苗載體、激發(fā)抗原特異的細胞免疫應(yīng)答，其技術(shù)、免疫特點、腫瘤干預(yù)效應(yīng)等相關(guān)的研究尚無報道。
　　本研究旨在探討重組細菌外膜囊泡作為一種新型治療性腫瘤

5、疫苗載體的特點與潛力。研究主要包括：1）利用基因工程手段將腫瘤抗原HPV16型E7蛋白呈遞在大腸桿菌OMVs上，獲得重組OMVs疫苗形式;2）在體外培養(yǎng)的巨噬細胞Raw264.7中，考察重組OMVs將自身成分及模式抗原GFP遞送至抗原遞呈細胞的能力;在體外誘導(dǎo)培養(yǎng)的骨髓來源樹突狀細胞(BMDCs)中，探討了重組OMVs被高效攝取的能力、囊泡結(jié)構(gòu)在攝取過程中的重要性及BMDCs攝取OMVs后的成熟情況;3）在C57BL/6小鼠TC-1移植

6、腫瘤模型中，評價了呈遞HPV16E7抗原的重組OMVs激發(fā)特異細胞免疫的能力及對已建立腫瘤的治療性干預(yù)效果。
　　結(jié)果表明，經(jīng)利用ClyA及硫氧還蛋白作為引導(dǎo)序列，可將HPV16E7蛋白呈現(xiàn)于OMVs表面及內(nèi)腔;OMVs可被Raw264.7及BMDCs有效攝取，且囊泡結(jié)構(gòu)對于攝取效率非常重要;OMVs能夠促進BMDCs表面共刺激分子CD80、CD86、CD83、CD40等的高表達及TNFα的分泌，顯著促進BMDCs的功能成熟;無需