海洋細(xì)菌TC-1的鑒定以及對(duì)香蕉枯萎菌4號(hào)小種抑菌作用的研究.pdf

1、香蕉枯萎病(Banana vasicular wilt)是由尖孢鐮刀菌[Fusarium oxysporum f.sp.cubense(E F.Smith)Snyder et Hansen(anamorph)]引起的一種世界性、毀滅性病害。已報(bào)道的香蕉枯萎菌有4個(gè)生理小種，我國有1號(hào)和4號(hào)小種。該病對(duì)我國乃至世界的香蕉生產(chǎn)危害極大，而目前還沒有一種真正有效的防治方法，因此尋求一種行之有效的方法防治香蕉枯萎病具有重要意義。 本論文

2、研究了從湛江近海海泥中分離篩選得到的海洋細(xì)菌TC-1對(duì)香蕉枯萎菌的拮抗抑制作用，主要結(jié)果如下： 1.海洋細(xì)菌TC-1對(duì)香蕉枯萎菌有很強(qiáng)的拮抗作用，無菌發(fā)酵液對(duì)香蕉枯萎菌菌落生長及孢子萌發(fā)具有明顯的抑制作用。無菌發(fā)酵液稀釋50倍時(shí)，第七天對(duì)香蕉枯萎菌生長的抑菌率為55.2％，稀釋40倍時(shí)孢子萌發(fā)的抑制率為92.5％。 2.根據(jù)形態(tài)和生理學(xué)特征、16S rDNA分子鑒定和API鑒定結(jié)果，初步鑒定海洋細(xì)菌TC-1為枯草芽孢桿菌

3、[Bacillus subtilis(Ehrenberg)Cohn1872]。 3.TC-1使病原菌菌絲、孢子和芽管形態(tài)發(fā)生變化，菌絲頂端或中間呈囊泡狀，扭曲、斷裂，或細(xì)胞原生質(zhì)外流成空泡；孢子變形，芽管尖端膨大成囊狀、變細(xì)、崩解。 4.TC-1菌株對(duì)立枯絲核菌(R. solani AG-4 SDBC-71)、水稻紋枯菌R. solaniAG-1IA GESD-6)、玉米小斑病菌(Bipolaris maydis)、辣椒

4、炭疽菌(Colletotrichumcapsici(syd.)Butl)、白地霉(Geotrichum candidum)、華麗腐霉(Pythium splendens)、芝麻枯萎病菌(F. oxysporum Schl.f.sp.sesami(Zap.)Cast)、黑曲霉(Aspergillus nige)有明顯的抑菌作用，抑菌帶寬分別為2.5mm、7.2mm、14.7mm、9.5mm、8.5mm、9.9mm、7.8mm、8.2mm，

5、帶寬最大的是玉米小斑病菌。無菌發(fā)酵液對(duì)香蕉枯萎菌1號(hào)小種(F. oxysporum f.sp.cubense Snyder et Hansen Race1)、黑根霉(Rhizopusnigricans)、黑曲霉(Aspergillus nige)、釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、芝麻枯萎病菌(F. oxysporum Schl.f.sp.sesami(Zap.)Cast)、辣椒炭疽菌(Colletotric

6、hum capsici(syd.)Butl)有較強(qiáng)的抗菌活性，抑菌圈直徑分別為17.0mm、16.8mm、14.8mm、14.4mm和26.2mm，對(duì)辣椒炭疽病菌的抑菌圈直徑最大。 5.從6種培養(yǎng)基中篩選出最利于TC-1菌株產(chǎn)抗菌活性物質(zhì)的培養(yǎng)基為BPDB液體培養(yǎng)基，抑菌圈直徑21.5mm；采用正交試驗(yàn)優(yōu)化BPDB培養(yǎng)基配方，得到最優(yōu)配方為：馬鈴薯200g，葡萄糖20g，牛肉膏20g，玉米粉7g、蛋白胨7g，蒸餾水1000mL，

7、pH自然，抑菌圈直徑23.0mm；采用正交試驗(yàn)優(yōu)化TC-1產(chǎn)抗菌活性物質(zhì)的發(fā)酵條件，得到最佳培養(yǎng)條件為：裝瓶量40％，培養(yǎng)溫度27℃，初始pH自然，發(fā)酵時(shí)間72h，搖床轉(zhuǎn)速200rpm，在該條件下培養(yǎng)得到的無菌發(fā)酵液形成的抑菌圈直徑為24.0mm。 6.在pH5～9的范圍內(nèi)，無菌發(fā)酵液的抑菌效果沒有顯著差異，表明酸堿對(duì)發(fā)酵液內(nèi)抗菌活性物質(zhì)的抗菌活性沒有影響；經(jīng)28℃、60℃和100℃不同時(shí)間的處理，隨著溫度的升高和時(shí)間的延長，抑

8、菌圈直徑逐漸減小，經(jīng)121℃處理30min后的抑菌圈直徑仍達(dá)17.9mm，表明發(fā)酵液中的抗菌活性物質(zhì)耐高溫。日光和燈光照射對(duì)TC-1發(fā)酵液的抑菌活性無影響。TC-1發(fā)酵液長時(shí)間存放的抑菌活性穩(wěn)定，經(jīng)100天4℃存放的抑菌圈直徑為16.7mm。 7.茚三酮檢測(cè)和雙縮脲反應(yīng)為陽性，表明抗菌粗提物可能為多肽、蛋白質(zhì)或氨基酸類物質(zhì)。SDS-PAGE電泳結(jié)果顯示抗菌粗提物中含有6種蛋白，分子量分別為18.0KD、19.0KD、23.5KD