拮抗放線菌的篩選及其對香蕉鐮刀菌枯萎病防治作用的研究.pdf

1、鐮刀菌枯萎病是一種對外檢疫性病害,由尖孢鐮刀菌古巴?；?Fusariumoxysporum f.sp.cubense)侵染引起的維管束系統(tǒng)性病害,又稱巴拿馬病、黃葉病。2008年在海南省各市縣香蕉種植區(qū)采集發(fā)病的香蕉植株近地面莖段維管束病變的樣本,分離得到的病原菌經(jīng)過形態(tài)學和致病性鑒定后,確定該病原菌為:尖孢鐮刀菌古巴?；?Fusarium oxysporum f.sp.cubense)。本論文是以該病原菌為靶標菌,分別從東方、八所

2、、黃流、三亞和廣東省湛江、徐聞、海安等香蕉種植地采集的根際土樣進行拮抗放線菌分離篩選,最終得到拮抗活性強且穩(wěn)定的拮抗菌株D4-4-L菌株,以該菌株為研究對象,對其鑒定、發(fā)酵條件的優(yōu)化及盆栽和田間防治效果等進行了研究,主要結(jié)果如下:
　　 (1)本實驗對從海南全島和廣東省香蕉種植地采集的根際土樣進行拮抗放線菌的分離與純化,得到放線菌菌株139個。通過紙片擴散法,篩選出對香蕉尖孢鐮刀菌枯萎病4號生理小種具有拮抗作用的菌株8個。分別用

3、這8株放線菌發(fā)酵上清液與香蕉枯萎病病原菌孢子懸浮液混合12 h后,測得有2株放線菌發(fā)酵上清液對病原菌孢子萌發(fā)的抑制率超過80％。進一步試驗表明,其中菌株D4-4-L不僅對香蕉枯萎病4號生理小種的菌絲有良好、穩(wěn)定的抑制作用,且對另外14個不同?；筒≡灿幸欢ǖ囊种谱饔?。
　　 (2)病原菌--尖孢鐮孢菌古巴專化型(Fusarium oxysporum f.sp.cubense)在不同pH值培養(yǎng)基上培養(yǎng)4 d后,發(fā)現(xiàn)尖孢鐮刀菌菌

4、落在pH值4.0-9.0范圍內(nèi)均可生長,pH值為6.0-7.0時最適,菌落直徑平均在3.7-3.9 cm之間。試驗結(jié)果表明:尖孢鐮刀菌在不同營養(yǎng)成分的培養(yǎng)基上培養(yǎng),N源對尖孢鐮刀菌菌絲生長的影響大于C源,生長到第6 d時,全糖型培養(yǎng)基產(chǎn)孢量最大,且小型分生孢子的產(chǎn)孢量也最大,使香蕉苗發(fā)病率達到100％,而大型分生孢子產(chǎn)生的最佳培養(yǎng)基為低氮型培養(yǎng)基。
　　 (3)通過對D4-4-L菌株進行培養(yǎng)性狀、形態(tài)特征、生理生化特征、16S

5、rDNA序列的測定及其系統(tǒng)發(fā)育分析的研究,表明D4-4-L為鏈霉菌屬(Streptomyces)。
　　 (4)為了提高鏈霉菌菌株D4-4-L的發(fā)酵濾液對香蕉枯萎病的防治效果,采用不同碳、氮源試驗設計,優(yōu)化其發(fā)酵培養(yǎng)基。使用優(yōu)化培養(yǎng)基搖瓶發(fā)酵試驗得出,使用優(yōu)化培養(yǎng)基:10％大米粉、1.5％大豆粉、K2HPO41g,MaCl1g,CaCO34g,自來水1000mL,pH7條件下進行搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)6d,有利于生物活性物質(zhì)的積累。