HPV16E7多肽對抗原特異性CTL免疫表型及其功能的影響.pdf

1、目的：
　　 研究高致癌性HPV16E7抗原肽體外誘導(dǎo)HLA-A2.1陽性正常人外周血抗原特異性CD8+細(xì)胞毒性T細(xì)胞(CTL)免疫表型及其功能狀態(tài)。
　　 方法：
　　 分離26例HLA-A2.1陽性正常人外周血單個核細(xì)胞，觀察組分別加入HPV16E711-20多肽(HLA*0201限制性表位肽/YMLDLQPETT)、重組人IL-7、IL-2，對照組加入無關(guān)肽HBVcore18-27、rhIL-7、rhIL-

2、2，體外培養(yǎng)7 d后用五聚體(pentamer)技術(shù)結(jié)合四色流式細(xì)胞術(shù)檢測抗原特異性CTL免疫表型(CD8+CD45RA+CD27-效應(yīng)性CTL、CD8+CD45RA-CD27-效應(yīng)性記憶CTL、CD8+CD45RA-CD27+中樞性記憶CTL、CD8+CD45RA+CD27+初始性CTL)及其FasL、穿孔素、顆粒酶B表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 病毒多肽體外刺激7 d后，外周血單個核細(xì)胞中抗原特異性CTL平均為0.73

3、％，明顯高于未刺激組(0.02％)及無關(guān)肽刺激組(0.01％)(P<0.001)。在抗原特異性CTL中，CD8+CD27+細(xì)胞占五聚體陽性和五聚體陰性細(xì)胞的百分率分別72.71％和56.78％，而CD8+CD45RA-細(xì)胞占五聚體陽性和五聚體陰性細(xì)胞的38.72％和54.01％。CD8+CD45RA-CD27-效應(yīng)性記憶CTL、CD8+CD45RA+CD27+初始性CTL占五聚體陽性細(xì)胞百分率分別為17.22％、50.79％，而其在五聚

4、體陰性細(xì)胞中百分率分別為32.75％、35.30％，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.001)；CD8+CD45RA+CD27-效應(yīng)性CTL、CD8+CD45RA-CD27+中樞性記憶CTL占五聚體陽性細(xì)胞百分率分別為10.07％、21.92％，而其在五聚體陰性細(xì)胞中百分率分別為10.47％、21.47％，差異無顯著性(P>0.05)。穿孔素、顆粒酶B、Fas-L陽性表達(dá)率在五聚體陽性CD3+CD8+細(xì)胞(HPV16E711-20表位特異性C

5、TL)中分別為47.01％、80.53％、26.48％，但其在五聚體陰性組分別為4.91％及50.59％、0.06％，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.001)。
　　 結(jié)論：
　　 HPV16E711-20多肽可誘導(dǎo)CD8+T細(xì)胞克隆擴增產(chǎn)生抗原特異性CD8+CTL。這些細(xì)胞的免疫表型存在高度異質(zhì)性，可能是處于不同分化階段的記憶及效應(yīng)細(xì)胞群體組成。推測抗原特異性CD8+CTL可通過表達(dá)穿孔素、顆粒酶B、Fas-L來殺傷病毒感