農(nóng)藥多簇人工抗原的免疫特異性及多殘留免疫金技術(shù).pdf

1、本研究首先合成了四種農(nóng)藥的半抗原：三唑磷半抗原THHe、克百威半抗原BFNB、毒死蜱半抗原CHBu以及甲基對硫磷半抗原MP5。為制備出能夠識別多種農(nóng)藥的“寬譜”特異性抗體，在人工抗原的制備上采用了一種全新的思路：采用碳二亞胺法，在同一載體蛋白上，依次偶聯(lián)了4種不同的半抗原，在國內(nèi)外首次制備得到了含有多種抗原決定簇的農(nóng)藥“多簇”人工抗原。 通過將多簇人工抗原單獨(dú)或混合免疫的方式獲得了對應(yīng)能夠同時(shí)識別相應(yīng)農(nóng)藥的高效價(jià)的寬譜特異性多克

2、隆抗體，這為農(nóng)藥等小分子化合物多殘留免疫快速測定技術(shù)研究開辟了一條新的途徑。采用間接競爭ELISA法分別測試BSA寬譜多抗(即免疫原為BSA多簇人工抗原，下同)、HSA寬譜多抗、KLH寬譜多抗和BSA&KLH寬譜多抗對相應(yīng)農(nóng)藥的親合性，對克百威、三唑磷、毒死蜱、甲基對硫磷這4種農(nóng)藥的I10范圍分別為：0.0024-0.0451μg/mL、0.0001-0.0013μg/mL、0.0062-0.0516μg/mL、0.0019-0.021

3、1μg/mL：I50范圍分別為0.0617-1.2208μg/mL、0.0242-0.1388μg/mL、0.4567-30.6194μg/mL、0.1156-7.5054μg/mL。 將4種半抗原分別與載體蛋白偶聯(lián)制備“單簇”抗原，再將單簇抗原混合免疫實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，同樣獲得了高效價(jià)的寬譜特異性多克隆抗體，但使用直接或間接競爭ELISA測試由混合單簇抗原免疫所得寬譜抗體對農(nóng)藥的親合性，未檢測出農(nóng)藥對抗原-抗體反應(yīng)有明顯的抑制作用。

4、 采用多簇抗原免疫實(shí)驗(yàn)動(dòng)物制備單克隆抗體未獲得成功，由單簇抗原分別免疫小鼠，成功制備出針對三唑磷、克百威、毒死蜱和甲基對硫磷的高特異性單抗，腹水效價(jià)均>1O5，其I10分別為：0.0207、0.2325、0.7556和0.4004ng/mL：I50分別為0.1356、3.4086、8.3890和3.2045 ng/mL。 選擇金免疫層析法作為實(shí)現(xiàn)農(nóng)藥多殘留檢測的技術(shù)手段。采用檸檬酸三鈉還原法制備理論粒徑為25nm的膠體金顆