我國靜注人免疫球蛋白制品的抗體多樣性及Fc段功能研究.pdf

1、目的:為了進一步補充和完善我國靜注人免疫球蛋白(intravenous immunoglobulin，IVIG)(pH4)制品的質量評價體系，分別建立IVIG中抗體的多樣性和Fc段（Fragment crystallizable region，Fc region）生物活性檢測方法;并利用上述建立的方法，開展我國主要血液制品廠家IVIG制品的抗體多樣性及Fc段功能的研究。本研究為進一步保障我國IVIG制品的質量提供技術支撐與數據基礎。

2、r>　　方法:1、利用雙向電泳技術結合蛋白免疫印跡方法，以大腸桿菌O157∶H7總蛋白為抗原，開展我國IVIG制品抗體譜的多樣性研究，并利用質譜方法對IVIG的目標抗原進行鑒定;
　　2、優(yōu)化藥典載錄的IVIG Fc段生物學活性（激活補體活性）檢測方法，開展我國IVIG制品Fc段激活補體活性的研究;
　　3、建立基于流式細胞術的IVIG Fc段生物學活性（結合受體活性）分析方法，開展我國IVIG制品Fc段結合受體活性的研究;

3、利用高效液相色譜方法分析IVIG中IgG二聚體含量，比較IgG二聚體含量與Fc段結合受體活性的關系。
　　結果:本研究成功建立了穩(wěn)定性良好的IVIG抗體譜及Fc段生物學活性評價方法，并利用該方法對國內外廠家IVIG制品分析，結果如下:
　　1、國內8個廠家IVIG制品識別反應的抗原蛋白點為156±48個，而國外Octapharma公司的IVIG識別反應的抗原點為124個。選取33個與IgG發(fā)生免疫反應的抗原蛋白進行質譜分析，

4、經鑒定為29種大腸桿菌蛋白，且這些蛋白在多種病原微生物中高度保守;
　　2、所有廠家IVIG制品中均檢測到有針對白喉類毒素的Fc段激活補體活性，均高于60％，符合《歐洲藥典》的檢定要求，但各廠家IVIG Fc段激活補體活性各不相同;國內各廠家IVIG Fc段激活補體活性與A廠家比較，F*＞H*＞G*＞A＞C＞I＞D*＞E*＞B*（“*”表示p＜0.01，差異顯著）;
　　3、所有廠家IVIG制品Fc段結合受體活性各不相同，同

5、一廠家不同批次IVIG樣品Fc段結合受體活性也有所不同，但均高于60％;與A廠家比較，部分廠家呈現顯著性差異;
　　4、IVIG制品中二聚體含量與其Fc結合受體能力無相關性。
　　結論:1、本研究建立的針對IVIG的抗體譜多樣性和Fc段生物學活性的評價體系，可有效用于IVIG制品針對病原微生物抗體多樣性的檢測評價，以及從Fc段結合受體、激活補體能力兩個方面分析IVIG Fc段功能，上述評價體系為保障IVIG的有效性提供了技術

6、支撐;
　　2、利用建立的方法對我國主要廠家的IVIG制品進行了檢測，結果表明參與研究的國內IVIG制品中均具有針對大腸桿菌O157∶H7的廣譜抗體，但識別抗原的數量、種類存在差異;各廠家IVIG制品Fc段生物學活性均不相同，部分廠家存在顯著性差異。說明目前市售的IVIG制品臨床有效性可能存在差異;
　　3、補充并完善現有的血漿蛋白質品質量評價體系，有助于更加深入分析產品特點，為指導臨床選擇用藥、提升血漿蛋白制品質量提供保障