黃芪多糖對肺癌細胞共培養(yǎng)體系中BMSCs增殖規(guī)律及TAFs相關分子表達的影響.pdf

1、目的：通過建立肺癌Lewis細胞（Lewis Lung Cancer，LLC）與骨髓間充質(zhì)干細胞(bone mesenchymal stem cells, BMSCs)共培養(yǎng)體系，研究腫瘤微環(huán)境下BMSCs的形態(tài)、增殖、周期及腫瘤相關成纖維細胞（Tumor-associated Fibroblasts, TAFs）蛋白表達的變化；分析并探討黃芪多糖（Astragalus polysaccharides, APS）對肺癌微環(huán)境中BMSCs

2、增殖規(guī)律的影響及保護作用。
　　方法：
　　1.采用CCK-8法于12~96 h分別檢測0~200μg/mL APS對BMSCs、LLC細胞體外增殖的影響，篩選APS最佳有效濃度；利用苯酚-硫酸法檢測6~72 h內(nèi) BMSCs、LLC細胞對最佳濃度APS體外代謝的影響，篩選APS最佳藥效時間；
　　2.建立LLC細胞和BMSCs的共培養(yǎng)體系，實驗分4組：正常BMSCs組、肺癌LLC組、共培養(yǎng)模型組及APS最佳藥物濃度干

3、預組，同時分別設立48 h換液、72 h換液及不換液3種不同處理方式；
　　3.通過CCK-8法、流式細胞術分別檢測共培養(yǎng)體系中各組細胞的增殖及細胞周期的變化；
　　4.采用 Western blot技術檢測共培養(yǎng)體系中各組細胞 TAFs標記分子α-SMA、FAP蛋白的表達變化。
　　結果：
　　1.與對照組相比，50μg/mL APS作用于BMSCs24~96 h促增殖作用明顯，且可抑制LLC增殖，差異有統(tǒng)計學

4、意義（P＜0.01）；100μg/mL與200μg/mL APS作用于LLC24~96 h起抑制作用，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01），作用于BMSCs60~96 h可抑制其增殖，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　2.隨著細胞體外培養(yǎng)時間延長，含50μg/mL APS的DMEM/F12完全培養(yǎng)基糖的含量呈遞減趨勢，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），36~48 h該含量降至半量。
　　3.倒置相差顯微鏡下，正常BMSCs

5、組細胞為梭形，形態(tài)均一，排列有序；Co-BMSCs組細胞形態(tài)不規(guī)則，排列紊亂，可見團簇狀生長；APS-Co-BMSCs組細胞大部分呈梭形，分布較均勻，偶見細長或團簇狀細胞。
　　4.與正常BMSCs組細胞相比，Co-BMSCs組細胞第3~7天生長速度顯著加快，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；與Co-BMSCs組細胞相比，APS-Co-BMSCs組細胞第5~7天生長速度緩慢，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　5.細胞周

6、期檢測顯示，與正常BMSCs組細胞相比，Co-BMSCs組細胞G1期比例降低， S期比例升高，差異有統(tǒng)計學意義（ P<0.05）；與 Co-BMSCs組細胞相比， APS-Co-BMSCs細胞G1期比例升高，S期比例降低，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　6.蛋白印跡結果表明，與正常BMSCs組細胞相比，Co-BMSCs組細胞α-SMA、FAP蛋白表達均明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；與 Co-BMSCs組細胞相

7、比， APS-Co-BMSCs組細胞α-SMA、FAP蛋白表達均下降，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。與不換液APS-Co-BMSCs組細胞相比，48 h換液及72 h換液APS-Co-BMSCs組細胞α-SMA、FAP蛋白表達下降，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），且48 h換液APS-Co-BMSCs組細胞α-SMA、FAP蛋白表達最少。
　　結論：肺癌微環(huán)境中BMSCs細胞生物學特性出現(xiàn)遺傳穩(wěn)定性變化，該變化可能與肺癌微環(huán)