GST-π表達(dá)及活性變化對人肺癌細(xì)胞耐藥的影響.pdf

1、目的：通過分別檢測依他尼酸（Ethacrynic acid，EA）作用下人肺腺癌SPCA-1、大細(xì)胞癌NCI-H-460、小細(xì)胞癌NCI-H-446細(xì)胞株中谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶-π（Glutathione S-transferasesπ，GST-π）的蛋白表達(dá)水平、酶活性及三種細(xì)胞在順鉑、阿霉素、VP-16三種化療藥物分別作用下的細(xì)胞生存率，來研究GST-π表達(dá)及活性的變化與三種肺癌細(xì)胞對該三種化療藥耐藥的相關(guān)性。 方法：將一定密度

2、、生長狀態(tài)良好的SPCA-1、NCI-H-460、NCI-H-446肺癌細(xì)胞，分別隨機分為實驗組（加入EA，濃度分別為60、80、100、160μmol/L，作用時間24h）和對照組，采用免疫熒光細(xì)胞化學(xué)方法檢測各組細(xì)胞中GST-π的蛋白表達(dá)水平，采用紫外分光光度法檢測GST-π酶活性。進一步通過MTT方法，分別檢測實驗組和對照組三種細(xì)胞，在順鉑、阿霉素、VP-16分別作用下的細(xì)胞生存率，并計算出細(xì)胞半數(shù)致死藥物濃度IC50。采用SPS

3、S11．5統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。 結(jié)果：1．免疫熒光細(xì)胞化學(xué)方法檢測結(jié)果，GST-π蛋白表達(dá)水平顯示，SPCA-1及NCI-H-446細(xì)胞實驗組的熒光強度明顯弱于對照組，提示EA可以抑制SPCA-1、NCI-H-446細(xì)胞GST-π的表達(dá)，并且GST-π表達(dá)水平與EA具有一定的濃度依賴關(guān)系，隨EA濃度增高表達(dá)逐漸減少，而NCI-H-460細(xì)胞實驗組熒光強度較對照組未見明顯變化，EA對NCI-H-460細(xì)胞GST-π的表達(dá)未

4、見明顯的抑制。2．紫外分光光度法檢測GST-π酶活性結(jié)果顯示，SPCA-1、NCI-H-460、NCI-H-446三種細(xì)胞對照組間GST-π酶活性未見顯著差異，實驗組較對照組GST-π酶活性抑制率分別為23．96%、30．80%、24．12%，三組細(xì)胞間酶活性抑制率未見顯著差異。3．MTT法檢測細(xì)胞生存率結(jié)果示：三種細(xì)胞對照組對順鉑的敏感性依次為，SPCA-1細(xì)胞株>NCI-H-446細(xì)胞株>NCI-H-460細(xì)胞株，并有顯著統(tǒng)計學(xué)意義

5、；NCI-H-460及NCI-H-446細(xì)胞較SPCA-1對阿霉素更加敏感，前兩者的阿霉素IC50明顯低于后者，并有顯著統(tǒng)計意義；三種細(xì)胞株對VP-16的敏感性未見明顯差別。NCI-H-446細(xì)胞在順鉑、阿霉素作用下，實驗組與對照組相比，IC50均明顯降低，并有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P<0．05），實驗組對化療藥更加敏感，SPCA-1細(xì)胞在順鉑、阿霉素作用下，實驗組較對照組IC50減低，但無顯著統(tǒng)計學(xué)意義。NCI-H-460在順鉑、阿霉素作用

6、下，實驗組與對照組IC50未見明顯差別。三種細(xì)胞在VP-16作用下，實驗組與對照組IC50均未見明顯差別。 結(jié)論：本實驗研究結(jié)果表明：EA可以抑制SPCA-1、NCI-H-460、NCI-H-446肺癌細(xì)胞株GST-π活性，并能抑制SPCA-1、NCI-H-446細(xì)胞GST-π蛋白水平的表達(dá)。NCI-H-446細(xì)胞在EA作用下，對順鉑、阿霉素的IC50均降低，化療敏感性增強。研究表明，降低GST-π表達(dá)及活性，可以提高NCI-H