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文檔簡介
1、目的:肺作為人體與大氣溝通的器官,經(jīng)常受到刺激性氣體、病毒、細(xì)菌、變應(yīng)原及大氣污染物等的侵襲,這些刺激易誘導(dǎo)肺產(chǎn)生活性氧類物質(zhì)而造成對肺的損傷乃至誘導(dǎo)肺癌發(fā)生,因此,肺比身體的其他器官更需要有效的防御機制及更高級的抗氧化酶,血紅素加氧酶-1(hemeoxygenase-1,HO-1)便是其中一種。HO-1也稱為熱休克蛋白-32(Hsp32),是目前最易被誘導(dǎo)的抗氧化應(yīng)激的重要酶,是血紅素代謝的限速酶。HO-1可分解血紅素生成膽綠素、CO
2、和鐵,膽綠素隨后被膽綠素還原酶還原成膽紅素,而游離鐵與轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合。HO-1與其分解代謝產(chǎn)物均有抗氧化功能,在應(yīng)激狀態(tài)下保護(hù)細(xì)胞和組織對抗應(yīng)激反應(yīng)。但是HO-1的這種細(xì)胞保護(hù)作用是沒有選擇性的,既可以保護(hù)正常細(xì)胞,又可以保護(hù)腫瘤細(xì)胞。目前對人體多種腫瘤的研究均檢測到HO-1的高表達(dá),并且HO-1的誘導(dǎo)和表達(dá)增高與實體腫瘤的發(fā)生、生長及轉(zhuǎn)移等密切相關(guān)。另外,除了細(xì)胞保護(hù)作用外,HO-1還被當(dāng)做一種促血管生成酶。血管生成是新的血管在原有血管
3、基礎(chǔ)上生成的過程,在腫瘤生長和擴散中起關(guān)鍵作用,當(dāng)腫瘤長到直徑超過2mm,若要繼續(xù)生長必須依賴新生血管的生成,因此HO-1的促血管生成作用有助于腫瘤進(jìn)展。血管內(nèi)皮生長因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)被認(rèn)為是最強的血管生成因子,VEGF表達(dá)水平反映了腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移和血管構(gòu)建的水平。本研究的目的是探討血紅素加氧酶-1(HO-1)在人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞和組織中的表達(dá)及其對肺癌血管內(nèi)皮生
4、長因子(VEGF)的影響和可能的作用機制。
方法:
1.選用肺腺癌細(xì)胞株A549和肺鱗癌細(xì)胞株SK-MES-1為研究對象,以永生化支氣管上皮細(xì)胞株HBE為對照,三種細(xì)胞株均培養(yǎng)于37℃、5%CO2和100%濕度培養(yǎng)箱中。
2.選用肺癌組織(腺癌33例,鱗癌12例)為研究對象,以癌旁正常組織為對照。
3.MTT法檢測細(xì)胞增殖活性。
4.采用實時熒光定量PCR(qRT-P
5、CR)法檢測非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞和組織中HO-1和VEGF基因的表達(dá)。
5.采用WesternBlotting法檢測非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞和組織中HO-1蛋白的表達(dá)。
結(jié)果:
1.三種細(xì)胞增殖情況
MTT實驗中,OD值反映細(xì)胞代謝活性,相對于HBE,A549和SK-MES-1的OD值明顯增高(P<0.05),而A549與SK-MES-1之間差異不明顯(P>0.05)。
2.細(xì)胞
6、株qRT-PCR結(jié)果
三株細(xì)胞株中HO-1mRNA均有表達(dá),定量分析結(jié)果示:兩株肺癌細(xì)胞株A549和SK-MES-1中HO-1mRNA較正常支氣管上皮細(xì)胞株HBE明顯增高(P<0.05),而且A549中HO-1mRNA表達(dá)水平比SK-MES-1高(P<0.05);肺腺癌細(xì)胞株A549和肺鱗癌細(xì)胞株SK-MES-1中HO-1mRNA和VEGFmRNA表達(dá)均較HBE增高(P<0.05),兩者之間存在線性相關(guān),其相關(guān)系數(shù)分別為1
7、.35(P<0.01)和9.80(P<0.01)。
3.肺癌組織和正常組織qRT-PCR結(jié)果
肺腺癌組織和肺鱗癌組織中HO-1mRNA均較正常組織表達(dá)增高(P<0.05);吸煙者比不吸煙者肺癌組織中HO-1mRNA表達(dá)增高(P<0.05);肺癌組織中HO-1mRNA和VEGFmRNA表達(dá)均較正常組織增高(P<0.05),兩者之間存在線性相關(guān),其相關(guān)系數(shù)為0.87(P<0.01)。
4.細(xì)胞和組織
8、中HO-1蛋白表達(dá)情況
Westernblotting結(jié)果圖顯示:三株細(xì)胞株中HO-1蛋白均有表達(dá),且在A549和SK-MES-1表達(dá)較HBE明顯增高;肺腺癌組織和肺鱗癌組織均較正常組織的HO-1蛋白表達(dá)增高。
結(jié)論:
HO-1在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞和組織中表達(dá)增高,吸煙能誘導(dǎo)HO-1的表達(dá),說明HO-1可能與非小細(xì)胞肺癌的起因有關(guān),并且高表達(dá)的HO-1可能在非小細(xì)胞肺癌發(fā)展過程中繼續(xù)發(fā)揮作用;HO
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