siRNA下調(diào)AEG-1基因表達對非小細胞肺癌細胞增殖、凋亡和侵襲的影響.pdf

1、溫州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文論文題El：墨i墜王遢△墾魚二!基國麥鯊盟韭叢二細胞照疸細胞塑殖)遇圭塑堡蕉的髭喧答辯委員會主席；邀鑫友答辯委員會成員：～魚浙生周丞到堡主塾囂趕論文答辯日期；呈Q!墨生!=!=旦坌晝旦溫州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文中文摘要墨i趔△至迥塹魚二!基國壹達懟韭叢!細胞韙疸細胞增殖!燙圭塑堡耋的量墮第一部分：AEG一1SiRNA干擾序列的篩選及效果驗證目的：設(shè)計合成針對人AEG—l基因的三對siRNA序列，驗證并從中篩選出對非

2、小細胞肺癌細胞基因沉默效果最優(yōu)的序列。方法：(1)根據(jù)RNA干擾原理，針對人AE6—1基因設(shè)計并化學(xué)合成三對AEGIsiRNA序列、一對陰性序列和一對帶熒光標(biāo)記的陰性序列(FAMsiRNA)。(2)用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑lipofetamin2000介導(dǎo)標(biāo)記的陰性對照序列(F斛siRNA)轉(zhuǎn)染非小細胞肺癌細胞，轉(zhuǎn)染6小時后，通過熒光顯微鏡和流式細胞檢測技術(shù)評價轉(zhuǎn)染效率，進行轉(zhuǎn)染條件的優(yōu)化。(3)篩選實驗分為空白對照組、轉(zhuǎn)染試劑對照組(MOCK

3、組)、陰性對照組以及三個siRNA干擾實驗組，轉(zhuǎn)染48小時后。通過熒光定量PCR和Westernblot分別觀察轉(zhuǎn)染前后非小細胞肺癌A549細胞中AEGImRNA和相應(yīng)蛋白表達的下調(diào)情況。從中選出一對最有效的AEGIsiRNA序列。結(jié)果：熒光定量PCR檢測mRNA及Westernblot檢測蛋白表達結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染48小時后，三對siENA均能顯著下調(diào)非小細肺癌細胞細胞AEGI基因的mRNA轉(zhuǎn)錄和蛋白表達水平，其mRNA表達抑制率分別為6

4、98％、696％和414％。三個序列中AEGIsiRNAI的沉默效果最優(yōu)。結(jié)論：成功設(shè)計和合成了針對AEGI基因的小干擾RNA序列，且AEG—lsiRNAI轉(zhuǎn)染細胞后，其mRNA和蛋白表達抑制效果較優(yōu)，為進一步實驗奠定了基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：AEG一1；siRNA；非小細胞肺癌；RNA干擾第二部分：AEGI表達下調(diào)對非小細胞肺癌細胞增殖、凋亡及侵襲的影響目的：采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法介導(dǎo)siRNA靶向沉默非小細胞肺癌細胞AEGI基因表達，探討其對細胞增