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文檔簡介
1、目的:將人RhoC基因正、反義真核表達載體分別轉(zhuǎn)染膽管癌QBC939細胞株,研究RhoC基因?qū)δ懝馨㏎BC939細胞株增殖和侵襲的影響。 方法:利用真核表達質(zhì)粒載體poDNA3.1/Hyg(+)構(gòu)建的包含RhoC正、反義基因全長序列的重組表達質(zhì)粒載體,以陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑LipofectamineTM2000轉(zhuǎn)染膽管癌QBC939細胞株,挑選潮霉素抗性克隆,RT-PCR檢測潮霉素抗性片段在轉(zhuǎn)染細胞中的表達,同時以空質(zhì)粒pcDN
2、A3.1/Hyg(+)轉(zhuǎn)染組作為對照,通過細胞克隆形成實驗、流式細胞儀檢測細胞周期以及體外Matrigel侵襲實驗研究重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染對膽管癌QBC939細胞株增殖與侵襲能力的影響。 結(jié)果:RT-PCR顯示轉(zhuǎn)染細胞中潮霉素抗性基因片段有表達,轉(zhuǎn)染成功,與QBC939細胞及空載體(QBC939-V)對照細胞相比,克隆形成實驗中正義RhoCeDNA轉(zhuǎn)染細胞(QBC939-S)克隆形成數(shù)目明顯增加,反義RhoCcDNA轉(zhuǎn)染細胞(QBC93
3、9-AS)克隆形成數(shù)目明顯減少,存在顯著性差異(P<0.05);流式細胞儀分析結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染后QBC939-AS細胞出現(xiàn)Gl期阻滯,而QBC939-S細胞Gl期細胞百分數(shù)增多,結(jié)果存在顯著性差異(P
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