IL-27對再生障礙性貧血患者CD4+T細(xì)胞增殖、凋亡的影響.pdf

1、目的：
　　檢測IL-27對AA患者外周血CD4+T細(xì)胞增殖和凋亡的影響，進一步了解IL-27對AA患者外周血CD4+T細(xì)胞數(shù)量上影響參與AA發(fā)病機制。
　　方法：
　　（1）采用密度梯度離心法分離SAA患者11例，NSAA患者9例分別分離外周血單個核細(xì)胞（PBMNCs），磁珠分選CD4+T細(xì)胞并應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測其純度；
　?。?）雙重免疫熒光染色、RT-PCR檢測CD4+T細(xì)胞表面IL-27受體表達（WSX-

2、1/TCCR和gp130）；
　?。?）用完全RPMI1640培養(yǎng)基重懸分選的CD4+T細(xì)胞，按5×104/200ul密度接種于96孔板中，每孔培養(yǎng)基200ul,分為3組，即空白組（200ul培養(yǎng)基+0.4ul rhIL-2）,對照組（200ul培養(yǎng)基重懸CD4+T懸浮細(xì)胞5×104/個+0.4ul IL-2），實驗組（200ul培養(yǎng)基重懸CD4+T懸浮細(xì)胞5×104/個+0.4ul IL-2+不同濃度IL-27），每組設(shè)三個復(fù)孔

3、，在避光，37℃，5％的CO2，飽和濕度的條件下培養(yǎng)72h；
　?。?）用完全RPMI1640培養(yǎng)基重懸分選的CD4+T細(xì)胞，按1×105/ml密度接種于24孔板中，每孔培養(yǎng)基1ml，分為對照組（CD4+T細(xì)胞懸液1×105/ml+2ul/ml IL-2）和實驗組（CD4+T細(xì)胞懸液1×105/ml+2ul/ml IL-2+50ng/ml IL-27）在避光，37℃，5%CO2，飽和濕度的條件下培養(yǎng)72h；
　　（5）利用C

4、CK-8法檢測IL-27對CD4+T細(xì)胞增殖的影響；
　?。?）利用Annexin V/PI法檢測IL-27對CD4+T細(xì)胞凋亡的影響。
　　結(jié)果：
　?。?）流式細(xì)胞術(shù)檢測發(fā)現(xiàn)經(jīng)磁珠分選后CD4+T細(xì)胞陽性率可達97%以上，分選純度高，可進行下一步實驗；
　?。?）RT-PCR及雙重免疫熒光染色可發(fā)現(xiàn)AA患者外周血CD4+T細(xì)胞可協(xié)同表達IL-27受體（WSX-1/TCCR和gp130）。隨著加入的IL-27濃

5、度的升高及時間的增加，CD4+T細(xì)胞增殖數(shù)量有所增加，50ng/ml時接近峰值，之后又有所降低。因此在選取IL-27的濃度時選取了經(jīng)驗值50ng/ml的濃度來進行相關(guān)實驗。在W/OIL-27組中SAA組增殖OD值高于NSAA組(t=4.875,P=0.002)；WIL-27組中SAA組增殖OD值低于NSAA組(t=6.676,P=0.001);
　?。?）IL-27促進AA患者外周血CD4+T細(xì)胞增殖，SAA患者中對照組OD值0.

6、416±0.022，實驗組0.462±0.018，增值促進率為200%，（t=2.261，P=0.05），NSAA患者中對照組OD值0.439±0.039，實驗組0.455±0.037，增值促進率為114%，（t=2.915，P=0.02）；
　?。?）IL-27抑制AA患者外周血CD4+T細(xì)胞凋亡，SAA患者中對照組CD4+T細(xì)胞凋亡率10.38±2.04%，實驗組CD4+T細(xì)胞凋亡率5.67±2.26%，（t=4.857，P=

7、0.001），NSAA患者中CD4+T細(xì)胞凋亡率9.72±2.78%，實驗組CD4+T細(xì)胞凋亡率6.50±2.56%，（t=3.759，P=0.01）。研究數(shù)據(jù)還表明，在W/OIL-27組中，SAA組凋亡率比NSAA高（t=3.351，P=0.02）；在WIL-27組，SAA比之NSAA凋亡的率反而降低（t=5.470，P=0.001），數(shù)據(jù)差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)論：
　　IL-27促進AA患者外周血CD4+T細(xì)胞的增